CD63は、ヒト好酸球の断片的な脱顆粒と化合物エキソサイトーシスをシャペロンする細胞内イベントと密接に関連しています

好酸球の活性化は、アレルギー性、炎症性、免疫調節反応の経過を決定する、前セイズ化された顆粒貯蔵メディエーターの分泌につながります。CD63は、膜貫通-4糖タンパク質スーパーファミリー（テトラスパニン）のメンバーであり、好酸球特異的（分泌）顆粒の限定膜に存在し、好酸球脱顆粒の潜在的な表面マーカーと考えられています。ただし、好酸球やその他の白血球におけるCD63の細胞内分泌輸送は理解されていません。ここでは、炎症性刺激、CCL11および腫瘍壊死因子αで刺激されたヒト好酸球の高解像度でのCD63の人身売買の包括的な調査を提供します。これは、それぞれ好酸球の分泌プロセスを明確に異なる分泌プロセスを誘導します。免疫型技術を含むさまざまな透過型電子顕微鏡アプローチを使用して、細胞内コンパートメントでCD63を検出するために、好酸球脱顆粒イベントに直接リンクしたCD63の主要な細胞内プールを特定しました。透過型電子顕微鏡検査の定量分析により、刺激に応じて、CD63は断片的な脱顆粒または化合物エキソサイトーシスによって分泌を起こしている顆粒内に濃縮され、細胞質の小胞と顆粒の動きを伴うCD63トラックが濃縮されることが実証されました。刺激後にCD63が細胞表面で観察されましたが、免疫ノゴルド電子顕微鏡検査により、強いCD63プールが細胞質に残っていることが明らかになりました。CCL11および腫瘍壊死因子αがCD63（+）大きな小胞状尿筋（好酸球ソンブレロ小胞）の形成の増加を引き起こし、CD63の細胞内翻訳に作用する可能性が高い分泌の過程で顆粒と融合したことは顕著です。全体として、好酸球顆粒由来の分泌経路に関連する活性、細胞内CD63人身売買を特定しました。これは、免疫応答の根底にある好酸球の複雑な分泌活動を理解するために重要です。

Eosinophil activation leads to secretion of presynthesized, granule-stored mediators that determine the course of allergic, inflammatory, and immunoregulatory responses. CD63, a member of the transmembrane-4 glycoprotein superfamily (tetraspanins) and present on the limiting membranes of eosinophil-specific (secretory) granules, is considered a potential surface marker for eosinophil degranulation. However, the intracellular secretory trafficking of CD63 in eosinophils and other leukocytes is not understood. Here, we provide a comprehensive investigation of CD63 trafficking at high resolution within human eosinophils stimulated with inflammatory stimuli, CCL11 and tumor necrosis factor α, which induce distinctly differing secretory processes in eosinophils: piecemeal degranulation and compound exocytosis, respectively. By using different transmission electron microscopy approaches, including an immunonanogold technique, for enhanced detection of CD63 at subcellular compartments, we identified a major intracellular pool of CD63 that is directly linked to eosinophil degranulation events. Transmission electron microscopy quantitative analyses demonstrated that, in response to stimulation, CD63 is concentrated within granules undergoing secretion by piecemeal degranulation or compound exocytosis and that CD63 tracks with the movements of vesicles and granules in the cytoplasm. Although CD63 was observed at the cell surface after stimulation, immunonanogold electron microscopy revealed that a strong CD63 pool remains in the cytoplasm. It is remarkable that CCL11 and tumor necrosis factor α triggered increased formation of CD63(+) large vesiculotubular carriers (eosinophil sombrero vesicles), which fused with granules in the process of secretion, likely acting in the intracellular translocation of CD63. Altogether, we identified active, intracellular CD63 trafficking connected to eosinophil granule-derived secretory pathways. This is important for understanding the complex secretory activities of eosinophils underlying immune responses.