セツキシマブのLC-MS生物分析へのナノ表面および分子指向性タンパク質分解の適用

背景：最近、抗体薬物のLC-MS生体分析に役立つナノ表面および分子オリエンテーションリミテッド（NSMOL）タンパク質分解の原理を報告しました。 方法論：NSMOLは、プロテアーゼのインモビル化ナノ粒子径（200 nm）および抗体収集樹脂孔（100 nm）の違いを利用するファブ選択的限定タンパク質分解です。NSMOLを使用したヒト血漿中のキメラ抗体セツキシマブ生物分析の完全な検証を実証しました。セツキシマブ相補性決定領域における署名ペプチド（SQVFFK、ASQSIGTNIHWYQQRおよびYASESISGIPSR）は、LC-MS多重反応モニタリングによって同時に定量化されました。 結論：このNSMOL定量は、0.586 µg/mLの感度と0.586〜300 µg/mLの直線性を示しました。完全な検証研究は、低MW薬物化合物のガイドライン基準をアーカイブしました。これらの結果は、NSMOLがセツキシマブ生物分析の重要な方法でもあることを示しています。

BACKGROUND: We recently reported the principle of nano-surface and molecular-orientation limited (nSMOL) proteolysis, which is useful for LC-MS bioanalysis of antibody drugs. METHODOLOGY: The nSMOL is a Fab-selective limited proteolysis which utilizes the difference of protease-immobilized nanoparticle diameter (200 nm) and antibody collection resin pore (100 nm). We have demonstrated the full validation for chimeric antibody cetuximab bioanalysis in human plasma using nSMOL. Signature peptides (SQVFFK, ASQSIGTNIHWYQQR and YASESISGIPSR) in cetuximab complementarity-determining region were simultaneously quantitated by LC-MS multiple reaction monitoring. CONCLUSION: This nSMOL quantification showed sensitivity of 0.586 µg/ml and linearity of 0.586 to 300 µg/ml. Full validation study archived the guideline criteria of low Mw drug compounds. These results indicate that nSMOL is also significant method for cetuximab bioanalysis.