分割された蛍光タンパク質を含む細胞の汎用性のあるタンパク質タグ付け

蛍光タンパク質融合の一般的な方法に加えて、ライブ細胞タンパク質イメージングは、ますます多くのエピトープタグの適用を見てきました。これらのタグのサイズが小さいため、機能的な摂動を減らし、信号増幅を可能にする場合があります。彼らの背景の問題に対処するために、私たちは、自己補完的な分割蛍光タンパク質を、生細胞タンパク質標識のエピトープタグとして適応させます。2つのタグ、GFP11とSFCHERRY11は、それぞれ超倍率GFPとSFCHERRYの11番目のβ鎖から派生しています。FP11-TAGのサイズが小さいため、CRISPRを介した相同性診断修復を介して内生ゲノム遺伝子座に挿入するための費用対効果の高いスケーラブルな方法を可能にします。タンデム配置FP11-TAGは、フラゲラ輸送粒子を追跡する際の蛍光信号の比例強化、またはライブ微小管イメージングの光退色の減少を可能にします。最後に、足場タンパク質オリゴマー化におけるタンデムGFP11タグの有用性を示します。これらの実験は、FP11-TAGのラベリングツールとしての汎用性と、イメージングアプリケーションと非イメージングアプリケーションの両方のためのマルチメリーコントロールツールを示しています。

In addition to the popular method of fluorescent protein fusion, live cell protein imaging has now seen more and more application of epitope tags. The small size of these tags may reduce functional perturbation and enable signal amplification. To address their background issue, we adapt self-complementing split fluorescent proteins as epitope tags for live cell protein labelling. The two tags, GFP11 and sfCherry11 are derived from the eleventh β-strand of super-folder GFP and sfCherry, respectively. The small size of FP11-tags enables a cost-effective and scalable way to insert them into endogenous genomic loci via CRISPR-mediated homology-directed repair. Tandem arrangement FP11-tags allows proportional enhancement of fluorescence signal in tracking intraflagellar transport particles, or reduction of photobleaching for live microtubule imaging. Finally, we show the utility of tandem GFP11-tag in scaffolding protein oligomerization. These experiments illustrate the versatility of FP11-tag as a labelling tool as well as a multimerization-control tool for both imaging and non-imaging applications.