エンドソーム上のテザリング因子EEA1の可動性は、HeLa細胞のEGF受容体エンドサイトーシスの刺激とともに減少します

初期エンドソームのホモタイプ融合を媒介するテザリング因子EEA1は、EGF受容体エンドサイトーシス細胞の血清不足および刺激の両方で膜結合状態に局在することが示されました。ただし、EEA1のダイナミクス挙動がEGF刺激の影響を受けるかどうかは不明です。FRAP分析により、期間間HELA細胞におけるEEA1サイトゾルから膜から膜から膜から膜から交換レートを調査しました。取得したデータは、血清浸透細胞とEGF刺激細胞の両方でモバイル画分で表される膜関連のEEA1タンパク質の大部分を使用して、2つの状態結合モデルに適合しました。高速回復状態は、それぞれ約1.6秒と2.8秒で、2つのケースで同様の半タイムでした。ただし、ゆっくりとサイクリングされたEEA1画分の回復ハーフタイムは、血清飢ved細胞（21〜99秒）と比較してEGF刺激で大幅に増加しました。EGF刺激時のEEA1蛍光回復の遅延は、エンドソーム膜上の活性化RAB5の増加、EEA1陽性小胞間のテザリングイベントの数の増加とそのクラスタリングによるものである可能性があると考えています。

Tethering factor EEA1, mediating homotypic fusion of early endosomes, was shown to be localized in membrane-bound state both in serum-deprived and stimulated for EGF receptor endocytosis cells. However, it is not known whether dynamics behavior of EEA1 is affected by EGF stimulation. We investigated EEA1 cytosol-to-membrane exchange rate in interphase HeLa cells by FRAP analysis. The data obtained fitted two-states binding model, with the bulk of membrane-associated EEA1 protein represented by the mobile fraction both in serum-starved and EGF-stimulated cells. Fast recovery state had similar half-times in the two cases: about 1.6 s and 2.8 s, respectively. However, the recovery half-time of slowly cycled EEA1 fraction significantly increased in EGF-stimulated comparing to serum-starved cells (from 21 to 99 s). We suppose that the retardation of EEA1 fluorescence recovery upon EGF-stimulation may be due to the increase of activated Rab5 on endosomal membranes, the growth of the number of tethering events between EEA1-positive vesicles and their clustering.