ドイツのキツネ（Vulpes vulpes）とアライグマ犬（nyctereutes procyonoides）におけるサルコシスティスsppの分子同定

200以上のSarcocystis spp。名前が付けられており、それらのほとんどは特定の捕食者とプレイサイクルに関与しているように見えます。Canidsの間では、ヨーロッパのキツネ（Vulpes Vulpes）とRaccoon Dog（Nyctereutes procyonoides）はヨーロッパに広く分布しており、おそらくSarcocystis sppの疫学において決定的なホストとして重要な役割を果たしています。感染。キツネからの合計50の小腸とアライグマ犬の38が、ドイツのブランデンブルク連邦州でサンプリングされました。粘膜の掻き取りを収集し、砂糖の浮選により分析し、卵形または胞子胞が検出されると、一晩沈降を行い、DNAを市販のキットで抽出しました。PCRは、18S rRNA遺伝子の断片（サイズは約850 bp）の断片を標的とするプライマーを使用して実施され、アンプリコンを精製して配列決定しました。決定的なシーケンスを持つサンプルをプラスミドにクローン化し、各アンプリコンから3つ以上のプラスミドを配列決定しました。Sarcocystis spp。オーシスト/胞子胞は、フォックスの38％（19/50）、アライグマ犬のサンプルの52.6％（20/38）で検出されました。オーシストDNAからのアンプリコンのシーケンス分析により、9個のフォックスと5個のアライグマ犬のサンプルに混合感染が明らかになりました。キツネのサンプルでは、​​最も頻繁に識別されるサルコシスティスspp。S. TenellaまたはS. Capracanis（10.0％）でした。S. miescheriana（8.0％）およびS. gracilis（8.0％）に続いて、鳥を中間宿主（6.0％）として使用するSarcocystis spp。、およびS. capreolicanis（4.0％）が続きます。アライグマの犬のサンプルでは、​​次の種と99％以上の同一性を持つ配列が検出されました。IH（10.5％）、S。TenellaまたはS.Capracanis（2.6％）およびS. capreolicanis（2.6％）として鳥を使用します。Sarcocystis spp。の推定有病率。粘膜の擦り傷を使用して決定された感染症は、糞便サンプルを分析することによって行われた関連研究よりも高かった。18S RRNA遺伝子増幅、クローニング、シーケンスの方法論は、Sarcocystis sppとの混合感染を特定するのに適しています。そして、これらの寄生虫種の潜在的な決定的な宿主に関する情報を収集する。

More than 200 Sarcocystis spp. have been named and most of them appear to be involved in a particular predator-prey cycle. Among canids, the European fox (Vulpes vulpes) and the raccoon dog (Nyctereutes procyonoides) are widely distributed in Europe and probably play an important role as definitive hosts in the epidemiology of Sarcocystis spp. infections. A total of 50 small intestines from foxes and 38 from raccoon dogs were sampled in the Federal State of Brandenburg, Germany. Mucosal scrapings were collected and analyzed by sugar flotation and when oocysts or sporocysts were detected, an overnight sedimentation was performed and DNA extracted with a commercial kit. A PCR was conducted using primers targeting a fragment of the 18S rRNA gene (with a size of approximately 850 bp) and the amplicons were purified and sequenced. Samples with an inconclusive sequencing were cloned into plasmids and ≥ 3 plasmids from each amplicon were sequenced. Sarcocystis spp. oocysts/sporocysts were detected in 38% (19/50) of fox and 52.6% (20/38) of raccoon dog samples. Sequencing analysis of amplicons from oocyst DNA revealed mixed infections in 9 fox and 5 raccoon dog samples. In the fox samples, the most often identified Sarcocystis spp. were S. tenella or S. capracanis (10.0%); S. miescheriana (8.0%) and S. gracilis (8.0%) followed by Sarcocystis spp., which use birds as intermediate hosts (6.0%), and S. capreolicanis (4.0%). In the raccoon dog samples, sequences with a ≥99% identity with the following species were detected: S. miescheriana (18.4%), S. gracilis (13.1%), Sarcocystis spp. using birds as IH (10.5%), S. tenella or S.capracanis (2.6%) and S. capreolicanis (2.6%). The estimated prevalence of Sarcocystis spp. infections determined using mucosal scrapings was higher than in related studies performed by analyzing faecal samples. The methodology of 18S rRNA gene amplification, cloning and sequencing is suitable to identify mixed infections with Sarcocystis spp. and to gather information on potential definitive hosts of these parasite species.