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Antimicrobial agents and chemotherapy2016Jun01Vol.60issue(6)

フルコナゾール耐性病原性酵母におけるベルベリン抗真菌活性:カンジダSPPのフローサイトメトリーとバイオフィルム成長阻害によって評価される作用メカニズム

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

真菌感染症の発生率、特にバイオフィルム形成に関連する真菌抗生物質耐性の発生率は大幅に増加し、罹患率と死亡率に寄与しています。したがって、新しい治療戦略を開発する必要があります。これに関連して、天然産物は、可能な抗真菌剤の主要な源泉として浮上しています。ベルベリンは、ベルベリリス・アキフォリウム、ベルベリス・vulgaris、ベルベリス・アリスタ、カナデンシス、およびフェロデンデンンアムレンスのベルベリンなどのベルベリス・ヴォルリス、ベルベリス・アリスタタ、ベルベリス・アリスタタなど、天然のハーブの根、根茎、茎の樹皮から分離されたプロトベルベリン型イソキノリンアルカロイドです。抗真菌活動。本研究では、フルコナゾール耐性カンジダおよびクリプトコッカスネオフォルマン株に対するベルベリンの潜在的な抗真菌効果、ならびにカンジダ属のバイオフィルム形態に対する抗菌効果が評価されました。ベルベリンの抗真菌効果は、スープの微量希釈法(臨床および実験室標準研究所のM27-A3法)とフローサイトメトリー技術によって決定されました。バイオフィルム評価のために、比色3-(4,5-ジメチル-2-チアゾリル)-2,5-ジフェニル-2H-テトラゾリウム臭化(MTT)アッセイを使用して、セシル細胞の感受性を決定しました。この研究で使用されている分離株は、CEARAの連邦大学の酵母(ラベル)の生物拡散と実験の実験室に属していました。24時間と72時間後、フルコナゾール耐性のカンジダとクリプトコッカスネオフォルマン株は、それぞれ8μg/mLおよび16μg/mLに等しいベルベリンのマイクを示しました。サイトメトリー分析により、ベルベリンによる治療は、おそらくアポトーシスによって細胞死をもたらした血漿およびミトコンドリア膜の完全性の変化を引き起こしたことが示されました。治療後のバイオフィルム形成分離株の評価は、バイオフィルム細胞活性の統計的に有意な減少を示した(P <0.001)。

真菌感染症の発生率、特にバイオフィルム形成に関連する真菌抗生物質耐性の発生率は大幅に増加し、罹患率と死亡率に寄与しています。したがって、新しい治療戦略を開発する必要があります。これに関連して、天然産物は、可能な抗真菌剤の主要な源泉として浮上しています。ベルベリンは、ベルベリリス・アキフォリウム、ベルベリス・vulgaris、ベルベリス・アリスタ、カナデンシス、およびフェロデンデンンアムレンスのベルベリンなどのベルベリス・ヴォルリス、ベルベリス・アリスタタ、ベルベリス・アリスタタなど、天然のハーブの根、根茎、茎の樹皮から分離されたプロトベルベリン型イソキノリンアルカロイドです。抗真菌活動。本研究では、フルコナゾール耐性カンジダおよびクリプトコッカスネオフォルマン株に対するベルベリンの潜在的な抗真菌効果、ならびにカンジダ属のバイオフィルム形態に対する抗菌効果が評価されました。ベルベリンの抗真菌効果は、スープの微量希釈法(臨床および実験室標準研究所のM27-A3法)とフローサイトメトリー技術によって決定されました。バイオフィルム評価のために、比色3-(4,5-ジメチル-2-チアゾリル)-2,5-ジフェニル-2H-テトラゾリウム臭化(MTT)アッセイを使用して、セシル細胞の感受性を決定しました。この研究で使用されている分離株は、CEARAの連邦大学の酵母(ラベル)の生物拡散と実験の実験室に属していました。24時間と72時間後、フルコナゾール耐性のカンジダとクリプトコッカスネオフォルマン株は、それぞれ8μg/mLおよび16μg/mLに等しいベルベリンのマイクを示しました。サイトメトリー分析により、ベルベリンによる治療は、おそらくアポトーシスによって細胞死をもたらした血漿およびミトコンドリア膜の完全性の変化を引き起こしたことが示されました。治療後のバイオフィルム形成分離株の評価は、バイオフィルム細胞活性の統計的に有意な減少を示した(P <0.001)。

The incidence of fungal infections and, in particular, the incidence of fungal antibiotic resistance, which is associated with biofilm formation, have significantly increased, contributing to morbidity and mortality. Thus, new therapeutic strategies need to be developed. In this context, natural products have emerged as a major source of possible antifungal agents. Berberine is a protoberberine-type isoquinoline alkaloid isolated from the roots, rhizomes, and stem bark of natural herbs, such as Berberis aquifolium, Berberis vulgaris, Berberis aristata, and Hydrastis canadensis, and of Phellodendron amurense Berberine has been proven to have broad antibacterial and antifungal activity. In the present study, the potential antifungal effect of berberine against fluconazole-resistant Candida and Cryptococcus neoformans strains, as well as against the biofilm form of Candida spp., was assessed. The antifungal effect of berberine was determined by a broth microdilution method (the M27-A3 method of the Clinical and Laboratory Standards Institute) and flow cytometry techniques, in which the probable mechanism of action of the compound was also assessed. For biofilm assessment, a colorimetric 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) assay was used to determine the susceptibility of sessile cells. The isolates used in the study belonged to the Laboratory of Bioprospection and Experiments in Yeast (LABEL) of the Federal University of Ceará. After 24 and 72 h, fluconazole-resistant Candida and Cryptococcus neoformans strains showed berberine MICs equal to 8 μg/ml and 16 μg/ml, respectively. Cytometric analysis showed that treatment with berberine caused alterations to the integrity of the plasma and mitochondrial membranes and DNA damage, which led to cell death, probably by apoptosis. Assessment of biofilm-forming isolates after treatment showed statistically significant reductions in biofilm cell activity (P < 0.001).

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