マイクロRONA-30は、放射線曝露後にマウスおよびヒト造血細胞における抗アポトーシス因子MCL-1を阻害します

我々は、マウスおよびヒト造血細胞における放射線誘発性炎症因子IL-1βおよびNFKB活性化によってMicroRNA-30（miR-30）発現が開始されたことを以前に報告しました。しかし、miR-30の下流エフェクターと放射線誘発細胞死におけるその特定の役割はよく理解されていません。本研究では、in vivoマウスおよびin vitroヒト造血細胞の内因性アポトーシス経路Bcl-2ファミリー因子のmiR-30発現と活性化に対する放射線の効果を評価しました。CD2F1マウスとヒトCD34+細胞は、異なる用量のガンマ放射にさらされました。生存研究に加えて、マウスの血液、骨髄（BM）および脾臓細胞およびヒトCD34+細胞を4時間、照射後1、3、および4日後に採取してアポトーシスおよびストレス応答シグナルを決定しました。我々の結果は、マウス血清miR-30、BMのDNA損傷マーカーγ-H2AX、およびBIM、BAXおよびBAK発現、シトクロムC放出、およびBMおよび/または脾臓細胞のカスパーゼ-3および-7活性化がAでアップレギュレギュレートされたことを示しました。放射線量依存的な方法。抗アポトーシス因子Mcl-1は有意にダウンレギュレートされたが、Bcl-2は照射されたマウス細胞およびヒトCD34+細胞ではあまり変化または変更されなかった。さらに、MCL-1 mRNAの3 'UTRで推定的なmiR-30結合部位が見つかりました。miR-30は、ルシフェラーゼレポーターアッセイによって実証された標的配列への結合と、miR-30ノックダウンCD34+細胞の照射によってMCL-1が阻害されないという発見を介してMCL-1の発現を直接阻害します。Bcl-2発現はmiR-30の影響を受けませんでした。私たちのデータは、MIR-30がMCL-1IN造血細胞を直接標的とすることにより、放射線誘発アポトーシスにおいて重要な役割を果たすことを示唆しています。

We previously reported that microRNA-30 (miR-30) expression was initiated by radiation-induced proinflammatory factor IL-1β and NFkB activation in mouse and human hematopoietic cells. However, the downstream effectors of miR-30 and its specific role in radiation-induced cell death are not well understood. In the present study, we evaluated effects of radiation on miR-30 expression and activation of intrinsic apoptotic pathway Bcl-2 family factors in in vivo mouse and in vitro human hematopoietic cells. CD2F1 mice and human CD34+ cells were exposed to different doses of gamma-radiation. In addition to survival studies, mouse blood, bone marrow (BM) and spleen cells and human CD34+ cells were collected at 4 h, and 1, 3 and 4 days after irradiation to determine apoptotic and stress response signals. Our results showed that mouse serum miR-30, DNA damage marker γ-H2AX in BM, and Bim, Bax and Bak expression, cytochrome c release, and caspase-3 and -7 activation in BM and/or spleen cells were upregulated in a radiation dose-dependent manner. Antiapoptotic factor Mcl-1 was significantly downregulated, whereas Bcl-2 was less changed or unaltered in the irradiated mouse cells and human CD34+ cells. Furthermore, a putative miR-30 binding site was found in the 3' UTR of Mcl-1 mRNA. miR-30 directly inhibits the expression of Mcl-1 through binding to its target sequence, which was demonstrated by a luciferase reporter assay, and the finding that Mcl-1 was uninhibited by irradiation in miR-30 knockdown CD34+ cells. Bcl-2 expression was not affected by miR-30. Our data suggest miR-30 plays a key role in radiation-induced apoptosis through directly targeting Mcl-1in hematopoietic cells.