単一の多能性幹細胞のための効果的で信頼性の高いゼノフリーの凍結保存プロトコル

化学的に定義されたゼノフリーの状態におけるヒト多能性幹細胞（HPSC）の効率的な凍結保存は、医学研究や細胞ベースの療法などの臨床アプリケーションに非常に望ましいものです。ここでは、フィーダーフリーのシングルHPSCの凍結保存のためのシンプルで効果的な遅い凍結放射解凍プロトコルを提示します。この凍結保存プロトコルには、10％ジメチルスルホキシド（DMSO）および10μMRho関連キナーゼ阻害剤Y-27632の2種類のXenoフリーの定義された媒体サプリメント（ノックアウト血清置換およびTESR2）への補給が含まれます。このプロトコルを使用して、高い融解後細胞回復（〜90％）と細胞膨張（〜70％）を実現できます。凍結保存された単一細胞は、HPSCの形態学的特性と多能性幹細胞の分化能力を保持します。

Efficient cryopreservation of human pluripotent stem cells (hPSCs) in chemically defined, xeno-free conditions is highly desirable for medical research and clinical applications such as cell-based therapies. Here we present a simple and effective slow freezing-rapid thawing protocol for the cryopreservation of feeder-free, single hPSCs. This cryopreservation protocol involves the supplementation of 10 % dimethyl sulfoxide (DMSO) and 10 μM Rho-associated kinase inhibitor Y-27632 into two types of xeno-free, defined media supplements (Knockout Serum Replacement and TeSR2). High post-thaw cell recovery (~90 %) and cell expansion (~70 %) can be achieved using this protocol. The cryopreserved single cells retain the morphological characteristics of hPSCs and differentiation capabilities of pluripotent stem cells.