象限依存性抗体を使用した免疫親和性抽出SE-HPLCと組み合わせた免疫親和性抽出は、四重ヒトパピローマウイルスワクチンの安定性と効力を示すアッセイの開発のために結合しました。

象限ヒトパピローマウイルス（HPV）ワクチンは、対応する感染性HPVウイルスタイプ6、11、16、18と構造的および免疫学的に類似した粒子（VLP）のような4種類の非感染性組換えウイルス（VLP）で配合されています。この研究では、HPVワクチンの決定のために、代替の業界に優しい、安定性および効力を示すアッセイプロトコルが開発され、検証されました。真空駆動型免疫親和性抽出（IAE）は、各タイプのHPV VLPに対するタイプ固有の立体構造依存性抗体を使用して採用されました。ELISAアッセイを使用して、IAEカラムの能力を評価して、4種類のVLPのそれぞれを4倍の混合物から特異的に分離しました。76.76±2.69、69.12±5.79、84.86±5.25および71.14±4.50％の平均パーセント回収率は、それぞれのケースで有意な干渉なしで、それぞれVLPS 6、11、16、18について得られました。次に、VLPS 6、11、16、および18について、それぞれ5.00〜20.00μg/mL（R> 0.998）の濃度範囲を超えるSE-HPLCを使用して抗原含有量を決定しました。SE-HPLCアッセイは、1.23-3.85μg/mLのLODで正確かつ正確（RSD <10.00％）が見つかりました。アッセイプロトコルは、単純さ、総分析時間、コストに関して、従来のELISAアッセイよりも優れていることがわかりました。IAE-SE-HPLCとELISAを使用して得られた分析結果との良好な相関は、バッチリリースの実装の可能性を伴う安定性と効力評価のための提案されたアッセイプロトコルの適合性を実証しました。このアプローチは、VLPに基づいた他のワクチン製剤の品質評価に適用する必要があります。

Quadrivalent human papillomavirus (HPV) vaccine is formulated of four types of non-infectious recombinant virus like particles (VLPs) that are structurally and immunologically similar to the corresponding infectious HPV virus types 6, 11, 16 and 18. With almost identical physical, chemical and structural properties of the four types of VLPs, ELISA remains the only approved in vitro potency testing assay. In this study, an alternative industry-friendly, stability- and potency-indicating assay protocol was developed and validated for the determination of HPV vaccine. Vacuum-driven immunoaffinity extraction (IAE) was employed using type-specific, conformation-dependent antibodies against each type of HPV VLPs. ELISA assay was employed to evaluate the ability of IAE columns to specifically separate each of the four types of VLPs from their quadrivalent mixture. Mean percentage recoveries of 76.76±2.69, 69.12±5.79, 84.86±5.25 and 71.14±4.50% were obtained for VLPs types 6, 11, 16 and 18, respectively with no significant interference in each case. Antigen content was then determined using SE-HPLC over a concentration range of 5.00-20.00μg/mL (r>0.998) for VLPs type 6, 11, 16 and 18, respectively. The SE-HPLC assay was found accurate and precise (RSD<10.00%) with LOD ranging from 1.23-3.85μg/mL. The assay protocol was found superior to conventional ELISA assay with respect to simplicity, total analysis time and cost. Good correlation between the results of analysis obtained using IAE-SE-HPLC and ELISA demonstrated the suitability of the suggested assay protocol for stability and potency assessment with a good potential for implementation for batch release. This approach should be applicable for quality assessment of other vaccine preparations based on VLPs.