RBM39-U2AF65スプライシングファクター複合体におけるUHM-ULM相互作用

RNA結合タンパク質39（RBM39）は、スプライシング因子であり、エストロゲン受容体およびJUN/AP-1の転写共活性化因子であり、その機能は多くの癌の悪性進行に関連しています。RBM39のC末端RRMドメインは、U2AFホモロジーモチーフファミリー（UHM）に属し、UHMリガンドモチーフ（ULM）として知られる短いトリプトファン含有ペプチドを介してタンパク質間相互作用を媒介します。ここでは、RBM39-UHMドメインの結晶および溶液NMR構造、およびU2AF65-ULMとの複合体の結晶構造が報告されています。RBM39-U2AF65の相互作用は、ヒト細胞抽出物からの共免疫沈降、等温滴定熱量測定、および精製タンパク質とのNMR化学シフト摂動実験によって確認されました。U2AF35-U2AF65やRBM39-SF3B155などの関連する複合体と比較すると、RBM39-UHM-U265-ULM複合体は、UHM-ULM結合界面の一般的および識別的な認識要素の両方を明らかにし、UHM-ULM結合界面の既知の特異性の合理性の合理性を提供します。ULMの相互作用。したがって、この研究は、U2AF35、U2AF65、RBM39、SF3B155などのスプライシング因子による特定のUHM-ULM相互作用の構造的基盤と、真核生物細胞の疾患関連の代替分裂を支配する分子間相互作用の継続的な研究のためのプラットフォームを確立します。

RNA-binding protein 39 (RBM39) is a splicing factor and a transcriptional co-activator of estrogen receptors and Jun/AP-1, and its function has been associated with malignant progression in a number of cancers. The C-terminal RRM domain of RBM39 belongs to the U2AF homology motif family (UHM), which mediate protein-protein interactions through a short tryptophan-containing peptide known as the UHM-ligand motif (ULM). Here, crystal and solution NMR structures of the RBM39-UHM domain, and the crystal structure of its complex with U2AF65-ULM, are reported. The RBM39-U2AF65 interaction was confirmed by co-immunoprecipitation from human cell extracts, by isothermal titration calorimetry and by NMR chemical shift perturbation experiments with the purified proteins. When compared with related complexes, such as U2AF35-U2AF65 and RBM39-SF3b155, the RBM39-UHM-U2AF65-ULM complex reveals both common and discriminating recognition elements in the UHM-ULM binding interface, providing a rationale for the known specificity of UHM-ULM interactions. This study therefore establishes a structural basis for specific UHM-ULM interactions by splicing factors such as U2AF35, U2AF65, RBM39 and SF3b155, and a platform for continued studies of intermolecular interactions governing disease-related alternative splicing in eukaryotic cells.