パーティション係数（log p）、分布係数（log D）、およびイオン化定数（PKA）の早期発見の決定

物理化学的特性の初期の予測は、生物発見中に実行可能なリード候補を見つけるために非常に望ましいです。パーティション係数（ログP）、分布係数（LOG D）、イオン化定数（PKA）を決定するにはいくつかの方法がありますが、それらのどれも、多様な化合物のセットのための単純で固定された小型化されたプロトコルを含むものではありません。したがって、これらの物理化学的特性を決定するために少量のサンプル量を必要とする、単純な、均一で中スループットのプロトコルを確立する必要があります。log Pとlog DはShake Flask法によって決定されました。そこでは、化合物を前飽和したノクタノールと水相の間に分配し（水/PBS pH 7.4）、各相の化合物の濃度をHPLCによって決定しました。PKA測定は、pH 1.0から13.0の範囲の一連の水バッファーを含む96ウェルマイクロタイタープレートでUV分光光度分析を使用しました。本明細書に記載されている中型スループットの小型プロトコルは、ログP、ログD、およびPKAを決定するために、セットアップが簡単で、非常に少量のサンプルを必要とする（3つのプロパティすべてで<5 mg）。すべての確立されたプロトコルは、多様な化合物のセットを使用して検証されました。

An early prediction of physicochemical properties is highly desirable during drug discovery to find out a viable lead candidate. Although there are several methods available to determine partition coefficient (log P), distribution coefficient (log D) and ionization constant (pKa), none of them involves simple and fixed, miniaturized protocols for diverse set of compounds. Therefore, it is necessary to establish simple, uniform and medium-throughput protocols requiring small sample quantities for the determination of these physicochemical properties. Log P and log D were determined by shake flask method, wherein, the compound was partitioned between presaturated noctanol and water phase (water/PBS pH 7.4) and the concentration of compound in each phase was determined by HPLC. The pKa determination made use of UV spectrophotometric analysis in a 96-well microtiter plate containing a series of aqueous buffers ranging from pH 1.0 to 13.0. The medium-throughput miniaturized protocols described herein, for determination of log P, log D and pKa, are straightforward to set up and require very small quantities of sample (< 5 mg for all three properties). All established protocols were validated using diverse set of compounds.