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[3H]リセルピン（[3H] Res）の精製されたウシクロムフィン顆粒膜への結合は、低膜濃度で研究されています。飽和等温線は、30 PMの解離平衡定数kdと30度のタンパク質8 pm/mgの結合部位の密度を示しました。関連率定数は4.0 x 10（5）M-1 S-1であり、計算されたものでした。解離速度定数は1.2 x 10（-5）S-1であり、約16時間の半lifeTimeに対応していました。この解離は低すぎて直接測定できませんでしたが、[3H] Res結合は、洗剤Triton X-100の添加後に失われたため、実際に可逆的でした。ジヒドロテトラベナジン（TBZOH）は、EC50が1時間のインキュベーション後37 nmから16時間後に600 nmに変化する、時間依存的に[3H] res結合を阻害しました。それどころか、[3H]基質によるノルアドレナリンによる結合阻害は、時間が独立していた。トランスポーターは、テトラベナジン（TBZ）またはRESのいずれかのみに結合し、平衡状態にある2つの異なる立体構造に存在することが提案されています。洗剤の効果は、この2つの構成モデルと一致していました。チョートバウンド[3H] TBZOHによって可溶化されたトランスポーターは、[3H] resではありません。一方、膜結合[3H] resへのコレートの添加は、その結合部位からリガンドを放出することなく膜を可溶化しました。TBZ結合の立体構造は、コレートによる溶解により得られ、RESがRES結合立体構造を安定させ、この界面活性剤による可溶化を可能にすることが提案されています。
[3H]リセルピン（[3H] Res）の精製されたウシクロムフィン顆粒膜への結合は、低膜濃度で研究されています。飽和等温線は、30 PMの解離平衡定数kdと30度のタンパク質8 pm/mgの結合部位の密度を示しました。関連率定数は4.0 x 10（5）M-1 S-1であり、計算されたものでした。解離速度定数は1.2 x 10（-5）S-1であり、約16時間の半lifeTimeに対応していました。この解離は低すぎて直接測定できませんでしたが、[3H] Res結合は、洗剤Triton X-100の添加後に失われたため、実際に可逆的でした。ジヒドロテトラベナジン（TBZOH）は、EC50が1時間のインキュベーション後37 nmから16時間後に600 nmに変化する、時間依存的に[3H] res結合を阻害しました。それどころか、[3H]基質によるノルアドレナリンによる結合阻害は、時間が独立していた。トランスポーターは、テトラベナジン（TBZ）またはRESのいずれかのみに結合し、平衡状態にある2つの異なる立体構造に存在することが提案されています。洗剤の効果は、この2つの構成モデルと一致していました。チョートバウンド[3H] TBZOHによって可溶化されたトランスポーターは、[3H] resではありません。一方、膜結合[3H] resへのコレートの添加は、その結合部位からリガンドを放出することなく膜を可溶化しました。TBZ結合の立体構造は、コレートによる溶解により得られ、RESがRES結合立体構造を安定させ、この界面活性剤による可溶化を可能にすることが提案されています。
The binding of [3H]reserpine ([3H]RES) to purified bovine chromaffin granule membranes has been studied at low membrane concentration. Saturation isotherms indicated a dissociation equilibrium constant KD of 30 pM and a density of binding sites of 8 pmol/mg of protein at 30 degrees C. The association rate constant was 4.0 X 10(5) M-1 s-1, and the calculated dissociation rate constant was 1.2 X 10(-5) s-1, corresponding to a half-lifetime of about 16 h. Although this dissociation was too low to be measured directly, [3H]RES binding was indeed reversible since it was lost after addition of the detergent Triton X-100. Dihydrotetrabenazine (TBZOH) inhibited [3H]RES binding in a time-dependent manner, EC50 varying from 37 nM after a 1-h incubation to 600 nM after 16 h. On the contrary, [3H]RES binding inhibition by the substrate noradrenaline was time independent. It is proposed that the transporter exists in two different conformations which bind exclusively either tetrabenazine (TBZ) or RES and which are in equilibrium. The effects of detergents were consistent with this two-conformation model. The transporter solubilized by cholate bound [3H]TBZOH, but not [3H]RES. On the other hand, addition of cholate to membrane-bound [3H]RES solubilized the membrane without releasing the ligand from its binding site. It is proposed that the TBZ-binding conformation is obtained by solubilization with cholate and that RES stabilizes the RES-binding conformation, allowing its solubilization by this detergent.
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