NDR/LATSキナーゼCBK1の複雑なハプロインスフィクリンベースの遺伝分析は、カンジダアルビカンスの複数の機能に関する洞察を提供します

遺伝的相互作用とネットワークの分析は生物学を理解するための強力なアプローチですが、ここでは病原性酵母カンジダアルビカンスに広く適用されていませんが、複雑なハプロース不足に基づいたスクリーニングと指示された遺伝的相互作用研究の両方の使用を説明し、機能をプローブすることを説明します。r：a：ce2およびm：orphogenesis（ram）経路C. albicans 5200 TN7変性誘導体のライブラリーの測定RAM経路の重要なキナーゼであるCBK1での親株ヘテロ接合の場合、血清誘発性フィラメント化の変化についてスクリーニングされました。表現型の確認とシーケンスによる挿入部位の識別に続いて、複雑なハプロ不全を示す36個のユニークな二重ヘテロ接合株のセットが得られました。RAM転写因子ACE2によって調節される大規模な遺伝子セットに加えて、細胞壁の生合成、細胞周期、極性、酸化ストレス、および窒素の利用に関連する遺伝子が同定されました。フォローアップ分析により、RAM経路は2成分規制キナーゼCHK1に関連する方法で酸化ストレス耐性に必要であることを最初に実証し、RAM経路と必須MPS1スピンドル極関連の間の潜在的な直接的なつながりを明らかにしました。キナーゼ。さらに、推定足場タンパク質であるCDC42関連遺伝子MSB1との遺伝的相互作用、および推定Rho GtPase活性化タンパク質（GAP）が同定されました。また、RGD3がCDC42のギャップであるという証拠を提供し、その局在化とリン酸化がCBK1に依存していることを示しています。

Although the analysis of genetic interactions and networks is a powerful approach to understanding biology, it has not been applied widely to the pathogenic yeast Candida albicans Here, we describe the use of both screening and directed genetic interaction studies based on complex haploinsufficiency to probe the function of the R: egulation of A: ce2 and M: orphogenesis (RAM) pathway in C. albicans A library of 5200 Tn7-mutagenized derivatives of a parental strain heterozygous at CBK1, the key kinase in the RAM pathway, was screened for alterations in serum-induced filamentation. Following confirmation of phenotypes and identification of insertion sites by sequencing, a set of 36 unique double heterozygous strains showing complex haploinsufficiency was obtained. In addition to a large set of genes regulated by the RAM transcription factor Ace2, genes related to cell wall biosynthesis, cell cycle, polarity, oxidative stress, and nitrogen utilization were identified. Follow-up analysis led to the first demonstration that the RAM pathway is required for oxidative stress tolerance in a manner related to the two-component-regulated kinase Chk1 and revealed a potential direct connection between the RAM pathway and the essential Mps1 spindle pole-related kinase. In addition, genetic interactions with CDC42-related genes MSB1, a putative scaffold protein, and RGD3, a putative Rho GTPase-activating protein (GAP) were identified. We also provide evidence that Rgd3 is a GAP for Cdc42 and show that its localization and phosphorylation are dependent on Cbk1.