ブタおよびマウスの脳毛細血管内皮細胞の分離、特性評価、および長期培養

ブタおよびマウスの脳毛細血管内皮細胞（CEC）の分離と長期栽培のための簡単な方法を提示します。2つの主要なポイントが作成されています。第一に、内皮細胞の「特徴的な」形態は、主に培地および秒の内皮細胞成長因子の存在に依存すること、内皮細胞としての細胞の同定は、因子染色やLDLアップタークなどの大きな血管内皮細胞に使用される基準の代わりに特別なレクチンを必要とすることです。純粋な脳毛細血管は、一連の遠心分離ステップによって分離されました。内皮細胞はコラゲナーゼ処理によって放出され、プラスチックペトリ皿で栽培されました。これは、コラーゲンやゼラチンコーティングよりも細胞付着の方が良いことが証明されました。微小血管細胞は、成長因子の存在または非存在のいずれかで培養されました。中程度の199 + 10％FCSは主に紡錘形の細胞を生成し、「丘と谷」パターンで成長し、数週間継続しない場合、3次元の管状構造を示しました。「石畳」表現型の細胞は、内皮細胞増殖サプリメント（ECG）とヘパリン（完全な培地と呼ばれる）で濃縮された199 + 10％FCSで促進されました。これらの細胞は数ヶ月間表現型を保持し、今まで最大35回継代することができました。これらの培養物からECGとヘパリンを省略した場合、細胞は細長くなり、平滑筋細胞に似ています。この効果は、細胞を完全な培地に移したときに可逆的でした。希釈を制限することでクローン化されたCECを使用すると、この反転現象も同様に気付きました。微小血管細胞を特徴付けるためにいくつかのマーカーを使用し、Bandeiraea simplicifoliaのレクチンが内皮細胞の非常に信頼性の高いマーカーであり、モノクローナル抗体α-SM-1（抗滑らかな筋肉細胞アクチン）が平滑筋細胞を決定するのに優れていることを示すことができます。

We present a simple method for isolation and long-term cultivation of porcine and murine cerebral capillary endothelial cells (cEC). Two major points are made. First, that the "characteristic" morphology of the endothelial cells depends mainly on the presence of endothelial cell growth factors in the culture medium and second, that the identification of the cells as endothelial cells requires a special lectin instead of criteria used for large vessel endothelial cells, such as factor VIII staining or LDL uptake. Pure cerebral capillaries were isolated by means of a series of centrifugation steps; endothelial cells were released by collagenase treatment and cultivated on plastic petri dishes, which proved to be better for cell attachment than collagen or gelatin coating. The microvascular cells were cultivated in either the presence or absence of growth factors. Medium 199 + 10% FCS produced mainly spindle-shaped cells, growing in the "hills and valleys" pattern, which, if not passaged for weeks, showed three dimensional tubular structures. Cells of the "cobblestone" phenotype were promoted in medium 199 + 10% FCS, enriched with endothelial cell growth supplement (ECGS) and heparin (referred to as complete medium). These cells retained their phenotype for months and could be passaged up to 35 times till now. If ECGS and heparin were omitted from these cultures, the cells became elongated and resembled smooth muscle cells. This effect was reversible when the cells were transferred to complete medium. With cEC, cloned by limiting dilution, we noticed this reversal phenomenon as well. We used several markers to characterize the microvascular cells and could show that the lectin of Bandeiraea simplicifolia is a highly reliable marker for endothelial cells and that the monoclonal antibody alpha-sm-1 (anti-smooth muscle cell actin) is excellent for determining smooth muscle cells.