N末端にミリストイル化されたタンパク質としてのヒト免疫不全ウイルスからのP17GAGの化学的特性評価

ヒト免疫不全ウイルスのN末端P17GAGタンパク質は、[3H]ミリス酸を含む感染細胞株の標識後に放射能を組み込むことが示されています。P17GAGを調査して、組み込まれた放射能がN末端のミリストイル化の結果であるかどうかを判断しました。このウイルスは、慢性感染したH9細胞を[3H]ミリス酸酸で標識した後、密度勾配遠心分離によって精製されました。P17GAGは免疫沈降により分離され、部分酸加水分解を受けました。[3H]加水分解によって生成されたミリストイルグリシンは、4-（p-ニトロベンジリデン）-2-トリデカノイロキサゾールに誘導体化され、逆方向の高透過性クロマトリアムによる逆方向の高透過性クロマトンによる誘導体、誘導体の誘導体化されていないN-ミリストイルグリシン標準に同定されました。。この研究は、P17GAGがN-ミリストイル化タンパク質であることを明確に示しています。

The N-terminal p17gag protein of the human immunodeficiency virus has been shown to incorporate radioactivity following labelling of infected cell lines with [3H]myristic acid. We investigated p17gag to determine whether the incorporated radioactivity was the consequence of N-terminal myristoylation. The virus was purified by density gradient centrifugation after labelling chronically infected H9 cells with [3H]myristic acid. The p17gag was isolated by immunoprecipitation and subjected to partial acid hydrolysis. [3H]Myristoylglycine generated by the hydrolysis was derivatized to 4-(p-nitrobenzylidene)-2-tridecanoyloxazol-5-one and identified against a co-eluting, derivatized, unlabelled N-myristoylglycine standard by reverse-phase high-performance liquid chromatography. This study unequivocally demonstrates that p17gag is an N-myristoylated protein.