抗原結合時に六量体を効率的に形成する抗体は、補体制限条件下で補体依存性の細胞毒性を誘導することができます

最近、IgG ABSは、細胞表面で発現した同族AGを結合した後、秩序あるヘキサマーに組織化できることを実証しました。このプロセスは、C1Q結合を促進するFC：FC相互作用に依存しています。これは、古典的な経路補体活性化の最初のステップです。IgGヘキサマーの形成と補体依存性細胞毒性（CDC）を刺激するエンジニアポイント変異に進みました。ヘキサマー層が強化された（六角形）CD20およびCD38 MABは、野生型の対応物よりも速く、より堅牢なCDCをサポートします。これらのMABのCDCの可能性をさらに調査するために、フローサイトメトリー、高解像度のデジタルイメージング、および4色の共焦点顕微鏡を使用して、B細胞株に対する活性と、単一補体成分の血清中の原発性慢性リンパ球性白血病細胞に対する活性を調べました。また、細胞に高密度で結合し、実質的な補体活性化を促進するアレムチュズマブ（抗CD52）およびMAB W6/32（抗HLA）のCDC活性を調べました。初期補体成分の血清と反応したmab-opsonized細胞のCDCはほとんど観察されませんでしたが、Hexabody mabsとw6/32と同様に、六角形のmabsが個々の個々の血清のCDCを促進するのに非常に効果的であることを発見して驚きました。補体コンポーネントC6〜C9。しかし、抗C9 MABで実施された中和研究により、C9が細胞株に対するCDC活性に必要であることが検証されました。これらの非常に効果的な補体活性化MABは、C3BやC9を含む細胞に活性化された補体成分を効率的に焦点を合わせ、MAC結合の非常に低いしきい値でCDCを促進するため、CDCの促進における有効性の向上に追加の洞察を提供します。

Recently, we demonstrated that IgG Abs can organize into ordered hexamers after binding their cognate Ags expressed on cell surfaces. This process is dependent on Fc:Fc interactions, which promote C1q binding, the first step in classical pathway complement activation. We went on to engineer point mutations that stimulated IgG hexamer formation and complement-dependent cytotoxicity (CDC). The hexamer formation-enhanced (HexaBody) CD20 and CD38 mAbs support faster, more robust CDC than their wild-type counterparts. To further investigate the CDC potential of these mAbs, we used flow cytometry, high-resolution digital imaging, and four-color confocal microscopy to examine their activity against B cell lines and primary chronic lymphocytic leukemia cells in sera depleted of single complement components. We also examined the CDC activity of alemtuzumab (anti-CD52) and mAb W6/32 (anti-HLA), which bind at high density to cells and promote substantial complement activation. Although we observed little CDC for mAb-opsonized cells reacted with sera depleted of early complement components, we were surprised to discover that the Hexabody mAbs, as well as ALM and W6/32, were all quite effective at promoting CDC in sera depleted of individual complement components C6 to C9. However, neutralization studies conducted with an anti-C9 mAb verified that C9 is required for CDC activity against cell lines. These highly effective complement-activating mAbs efficiently focus activated complement components on the cell, including C3b and C9, and promote CDC with a very low threshold of MAC binding, thus providing additional insight into their enhanced efficacy in promoting CDC.