BT Cry毒素の同時検出のための広範なヒトドメイン抗体の選択と応用

Bt Cry Toxinは、遺伝子組み換え作物（GMC）の形質転換に使用される一種のバイオトキシンです。この研究では、合計15の陽性クローンが、5ラウンドの親和性選択によってヒトドメイン抗体ライブラリーから分離されたBT cry毒素に結合する可能性があります。PCR増幅および酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）の分析によれば、最も陽性ファージドメイン抗体（F5）遺伝子をPET26Bベクターにクローニングし、大腸菌BL21で発現しました。精製された抗体を使用して、CRY1AB、CRY1AC、CRY1B、CRY1C、CRY1F毒素の間接的な競合ELISA（IC-ELISA）をそれぞれ開発しました。IC-ELISAの標準曲線の作業範囲は0.258-1.407μg/mLで、培地阻害濃度（IC50）は0.727-0.892μg/mLで、検出限界（IC10）は0.029-0.074μg/mLでした。毒素を叫ぶ。cry1ab、cry1ac、cry1b、cry1c、およびcry1f毒素によるF5ドメイン抗体の親和性は、1.21-5.94×10（7）m（-1）でした。スパイクされた小麦サンプルからの5種類のBTクライ毒素の平均回収率は、81.2％-100.8％の範囲で、CVは2.5％-9.4％でした。結果は、農産物サンプルにおけるBT Cry毒素の同時検出のために、広範なヒトドメイン抗体を正常に取得したことを示しました。

Bt Cry toxin is a kind of bio-toxins that used for genetically modified crops (GMC) transformation widely. In this study, total 15 positive clones could bind the Bt Cry toxins which isolated from a human domain antibody library by 5 rounds affinity selection. According to analyzing of PCR amplification and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), the most positive phage domain antibody (named F5) gene was cloned into the pET26b vector and expressed in E. coli BL21. The purified antibody was used to develop an indirect competitive ELISA (IC-ELISA) for Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1B, Cry1C and Cry1F toxins, respectively. The working range of detection for standard curves in IC-ELISA were 0.258-1.407 μg/mL, the medium inhibition concentration (IC50) were 0.727-0.892 μg/mL and detection limit (IC10) were 0.029-0.074 μg/mL for those Bt Cry toxins. The affinity of F5 domain antibody with Cry1Ab, Cry1Ac, Cry1B, Cry1C and Cry1F toxins were 1.21-5.94 × 10(7) M(-1). The average recoveries of the 5 kinds of Bt Cry toxins from spiked wheat samples were ranged from 81.2%-100.8% with a CV at 2.5%-9.4%. The results showed that we successfully obtained the broad-specificity human domain antibody for simultaneous detection of Bt Cry toxins in agricultural product samples.