Hoechst 33342による核染色による細胞死の分析

健康な細胞の核は一般に球形であり、DNAは均等に分布しています。アポトーシス中、DNAは凝縮されますが、このプロセスは壊死中には発生しません。したがって、核凝縮は、アポトーシス細胞と健康な細胞または壊死細胞を区別するために使用できます。Hoechst 33342または4 '、6-ジアミジノ-2-フェニルインドール（DAPI）などのDNAに結合する染料は、核凝縮を観察するために使用できます。これらの染料は、紫外線で励起されると461 nmで蛍光を発し、したがって、〜350 nmで光を放出し、〜460 nmの光の透過率を可能にする光源を備えた従来の蛍光顕微鏡を使用して視覚化できます。このプロトコルは、Hoechst 33342で染色された細胞の染色と視覚化について説明しますが、DAPIまたは他の染料で染色するために適応できます。

The nuclei of healthy cells are generally spherical, and the DNA is evenly distributed. During apoptosis the DNA becomes condensed, but this process does not occur during necrosis. Nuclear condensation can therefore be used to distinguish apoptotic cells from healthy cells or necrotic cells. Dyes that bind to DNA, such as Hoechst 33342 or 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), can be used to observe nuclear condensation. These dyes fluoresce at 461 nm when excited by ultraviolet light and can therefore be visualized using conventional fluorescent microscopes equipped with light sources that emit light at ∼350 nm and filter sets that permit the transmission of light at ∼460 nm. This protocol describes staining and visualization of cells stained with Hoechst 33342, but it can be adapted for staining with DAPI or other dyes.