4：蚊アレルギーの診断のための新しい67-kda aedes aegypti蚊の唾液アレルゲン

背景：蚊のアレルギーの正確な診断は、蚊の唾液アレルゲンを得るという面倒な仕事によって妨げられています。私たちは以前、3つの組換え（R）ネズミのネッタイシマカの蚊の唾液アレルゲンを研究しました。 方法：RAED A 4は、アニオンとカチオン交換クロマトグラフィーの組み合わせによって精製され、免疫ブロッティングによって識別され、バキュロウイルス/昆虫細胞系を使用して発現しました。A.唾液抽出物は、私たちの研究室で調製されました。実験型蚊からの陽性蚊帯検査を受けた13人の血清中の4特異的免疫グロブリンE（IgE）およびIgG抗体を測定するために、間接酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）が開発されました。負の咬傷検査を受けた18人の血清は、コントロールとして機能しました。 結果：精製されたものは、ELISAおよび免疫ブロットで検出されたように、蚊アレルギー血清のIgEに縛られた4を飼育しました。RAED A 4への結合は、A。aegypti抽出物を添加することにより、用量依存的に阻害される可能性があります。蚊アレルギーの個人は、コントロールよりも4特異的IgEおよびIgGのRAEDの平均レベルが有意に高い。カットオフレベルとしてコントロール±2 SDの平均を使用して、13人のアレルギー患者の46％が正のIgEを持っていましたが、コントロールは陽性ではありませんでした（P <0.001）。 結論：AED A 4は、蚊の唾液の主要なアレルゲンです。その組換え型には加水分解酵素機能があり、蚊アレルギーの診断に使用できます。

BACKGROUND: Accurate diagnosis of mosquito allergy has been hampered by the laborious task of obtaining mosquito salivary allergens. We have previously studied 3 recombinant (r) Aedes aegypti mosquito salivary allergens: rAed a 1, rAed a 2 and rAed a 3. Here, we report the expression, purification, identification and evaluation of rAed a 4, a 67-kDa α-glucosidase. METHODS: rAed a 4 was expressed using a baculovirus/insect cell system, purified by a combination of anion- and cation-exchange chromatography, and identified by immunoblotting. A. aegypti saliva extract was prepared in our laboratory. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed to measure rAed a 4-specific immunoglobulin E (IgE) and IgG antibodies in sera from 13 individuals with a positive mosquito-bite test from a laboratory-reared mosquito. Sera from 18 individuals with a negative bite test served as controls. RESULTS: Purified rAed a 4 bound to the IgE in mosquito-allergic sera, as detected by ELISA and immunoblotting. The binding of rAed a 4 to IgE could be inhibited in a dose-dependent manner by the addition of an A. aegypti extract. Mosquito-allergic individuals had significantly higher mean levels of rAed a 4-specific IgE and IgG than controls. Using the mean of the controls ± 2 SD as a cut-off level, 46% of the 13 allergic individuals had a positive IgE, while none of the controls was positive (p < 0.001). CONCLUSIONS: Aed a 4 is a major allergen in mosquito saliva. Its recombinant form has the hydrolase function and can be used for the diagnosis of mosquito allergy.