複製欠損アデノウイルスベクターの部分的なE3欠失により、潜在的に毒性のある導入遺伝子産物の安定した発現が可能になります

アデノウイルス（AD）は、ウイルスベクターの構築に広く使用されており、最も一般的にはE1および/またはE3ゲノム領域の欠失があります。以前は、チンパンジー由来AD（ADC）ウイルスに基づいて、HIV-1のエンベロープタンパク質（ENV）をそのようなベクターに挿入しようとする試みが阻止されていました。ここでは、HIV-1のENVを発現する血清型C6のE1およびE3溶離型ADCベクターの遺伝的不安定性が、抗アポトーシス活性を伴うE3配列の再挿入により克服できることを説明します。この部分的なE3の欠失は、おそらくENV誘発細胞アポトーシスにより、HEK-293包装細胞株の早期死を遅らせると思われます。同じ部分的なE3欠失は、明確なADC血清型であるADC7に基づいた安定した糖タンパク質140（GP140）およびGP160発現ADベクターの生成も可能にします。部分的なE3欠失を含むENVを発現するADCベクターは、連続細胞培養の合格時に遺伝的に安定し、他のADCベクターのものに匹敵する収量を生成し、マウスの導入遺伝子産物特異的抗体応答を誘導します。それにより、部分的なE3欠失により、ADベクターによって表現できるトランスジェンのレパートリーの拡大が可能になります。

Adenovirus (Ad) is used extensively for construction of viral vectors, most commonly with deletion in its E1 and/or E3 genomic regions. Previously, our attempts to insert envelope proteins (Env) of HIV-1 into such vectors based on chimpanzee-derived Ad (AdC) viruses were thwarted. Here, we describe that genetic instability of an E1- and E3-deleted AdC vector of serotype C6 expressing Env of HIV-1 can be overcome by reinsertion of E3 sequences with anti-apoptotic activities. This partial E3 deletion presumably delays premature death of HEK-293 packaging cell lines due to Env-induced cell apoptosis. The same partial E3 deletion also allows for the generation of stable glycoprotein 140 (gp140)- and gp160-expressing Ad vectors based on AdC7, a distinct AdC serotype. Env-expressing AdC vectors containing the partial E3 deletion are genetically stable upon serial cell culture passaging, produce yields comparable to those of other AdC vectors, and induce transgene product-specific antibody responses in mice. A partial E3 deletion thereby allows expansion of the repertoire of transgenes that can be expressed by Ad vectors.