パンアセチル - リジン抗体生成の代替戦略

リジンのアセチル化は、細胞シグナル伝達における重要な翻訳後修飾です。アセチローム研究では、高品質の汎アセチル - リジン抗体が、その後の質量分析分析のためのアセチル化ペプチドの濃縮の成功の鍵です。ここでは、抗原としてアセチル化ペプチドの合成されたランダムライブラリを使用して、ポリクローナル汎アセチル - リジン抗体を生成する代替方法を示します。私たちの抗体は、ELISAおよびドットブロットを介してアセチル - リジンペプチド/タンパク質に特異的であるとテストされています。プールされると、5つの抗体がアセチル - リジンペプチドに対する広範な反応性を示し、ペプチド被覆の観点から市販の抗体を補完します。抗体カクテルに結合したペプチドのコンセンサス配列は、市販の抗体のそれとわずかに異なります。最後に、我々の抗体は、HEK293細胞のアセチロームを分析するために概念実証でテストされています。合計で416個のタンパク質から1557個のアセチル化ペプチドを特定しました。したがって、我々は、我々の抗体がアセチローム研究に適切に資格があり、既存の市販の抗体を補完できることを実証しました。

Lysine acetylation is an important post-translational modification in cell signaling. In acetylome studies, a high-quality pan-acetyl-lysine antibody is key to successful enrichment of acetylated peptides for subsequent mass spectrometry analysis. Here we show an alternative method to generate polyclonal pan-acetyl-lysine antibodies using a synthesized random library of acetylated peptides as the antigen. Our antibodies are tested to be specific for acetyl-lysine peptides/proteins via ELISA and dot blot. When pooled, five of our antibodies show broad reactivity to acetyl-lysine peptides, complementing a commercial antibody in terms of peptide coverage. The consensus sequence of peptides bound by our antibody cocktail differs slightly from that of the commercial antibody. Lastly, our antibodies are tested in a proof-of-concept to analyze the acetylome of HEK293 cells. In total we identified 1557 acetylated peptides from 416 proteins. We thus demonstrated that our antibodies are well-qualified for acetylome studies and can complement existing commercial antibodies.