HINT1は、ガーディン活性を調節することにより、in vitroで肝細胞癌細胞の移動と浸潤を抑制します

ヒスチジントライアドヌクレオチド結合タンパク質1（HINT1）は、腫瘍抑制遺伝子の過剰なものです。癌細胞の移動におけるその役割は以前に推測されていません。現在の研究では、肝細胞癌（HCC）患者の転移性および非転移リンパ節におけるHINT1の発現を調べ、さらにAKTおよびERK1/2のリン酸化とリン酸化に対するHINT1発現の効果、およびさらに、およびさらに、HINT1発現の効果が解明されました。in vitroでHCC細胞。一次HCC組織および転移性および非転移リンパ節におけるHINT1およびGirdinの発現は、RT-PCRアッセイによって決定されました。HEPG2細胞に、HINT1または小さな干渉RNA（siRNA）を過剰発現するプラスミドベクターをトランスフェクトし、HINT1、Girdin、HINT1 Plus Girdin、またはスクランブルRNAを標的としました。HCC細胞の移動と浸潤は、創傷およびトランスウェルアッセイによって検査されました。タンパク質発現は、免疫蛍光および免疫ブロットアッセイによって検出されました。RT-PCRアッセイは、HINT1のメッセンジャーRNA（mRNA）転写レベルが、一次HCC組織および非転移性リンパ節のそれよりも著しく低いことを明らかにしました（P <0.01）。対照的に、GirdinのmRNA転写レベルは、非転移性リンパ節よりも有意に高かった（P <0.05）。さらに、HINT1のsiRNAノックダウンにより、HEPG2細胞のGIRDINのmRNA転写レベルが大幅に増加しました（P <0.05）。創傷アッセイとトランスウェルアッセイにより、siRNAによるHINT1ノックダウンが、スクランブルされたsiRNAをトランスフェクトしたHEPG2細胞と比較して、HEPG2細胞の移動と浸潤を大幅に促進することが示されました。HINT1ノックダウンはまた、HEPG2細胞のGirdinとAktのリン酸化が大幅に増加したことをもたらしましたが（P <0.05）、しかし、これはsiRNAによるGirdinノックダウンによって効果的に中止されました（P <0.05）。HINT1は転移性リンパ節でダウンレギュレートされており、GirdinおよびAktの発現とリン酸化を調節することにより、in vitroでのHCC細胞の移動と浸潤に関係しています。HINT1-GIRDIN-AKTシグナル伝達軸は、HCCの移動と侵入における役割のためにさらに分析され、腫瘍の成長と転移を抑制するために治療的に標的とする必要があります。

Histidine triad nucleotide-binding protein 1 (Hint1) is a haploinsufficient tumor suppressor gene. Its role in cancer cell migration has not been previously speculated. In the current study, we examined the expression of Hint1 in metastatic and non-metastatic lymph nodes of hepatocellular carcinoma (HCC) patients and further elucidated the effect of Hint1 expression on girdin expression and phosphorylation of AKT and ERK1/2 and on the migration of HCC cells in vitro. Expression of Hint1 and girdin in primary HCC tissues and metastatic and non-metastatic lymph nodes was determined by RT-PCR assays. HepG2 cells were transfected with plasmid vectors overexpressing Hint1 or small interfering RNA (siRNA) targeting Hint1, girdin, Hint1 plus girdin, or the scrambled RNA. Migration and invasion of HCC cells were examined by wound and Transwell assays. Protein expression was detected by immunofluorescence and immunoblotting assays. RT-PCR assays revealed that the messenger RNA (mRNA) transcript levels of Hint1 were markedly lower than those of primary HCC tissues and non-metastatic lymph nodes (P < 0.01). By contrast, the mRNA transcript levels of girdin were significantly higher than non-metastatic lymph nodes (P < 0.05). Furthermore, siRNA knockdown of HINT1 resulted in a significant increase in the mRNA transcript levels of girdin in HepG2 cells (P < 0.05). Wound assays and Transwell assays showed that Hint1 knockdown by siRNA significantly enhanced the migration and invasion of HepG2 cells compared to HepG2 cells transfected with scrambled siRNA. Hint1 knockdown also led to significantly increased phosphorylation of girdin and AKT in HepG2 cells (P < 0.05), which, however, was effectively aborted by girdin knockdown by siRNA (P < 0.05). Hint1 is downregulated in metastatic lymph nodes and is implicated in migration and invasion of HCC cells in vitro by modulating girdin and AKT expression and phosphorylation. The Hint1-girdin-AKT signaling axis should be further dissected for its role in HCC migration and invasion and may be therapeutically targeted to suppress tumor growth and metastasis.