ヒトおよびブタヒスタミンN-メチルトランスフェラーゼ（HMT）のモノクローナル抗体は、タンパク質の発現と局在研究を促進します

目的：ヒスタミン不活性化酵素ヒスタミンN-メチルトランスフェラーゼ（HMT）に適した抗体の欠如は、これまでのところ、人間および他の哺乳類におけるHMTタンパク質の直接的な分析を防ぎました。 方法：一連のモノクローナル抗体は、in vitroで発現したヒトおよびブタHMTを免疫するマウスを免疫することにより生成されました。抗体は、免疫ブロッティングと免疫組織化学染色によって特徴付けられました。 結果：ヒトHMTに特異的な6つの異なるモノクローナル抗体と、ブタHMTに特異的な4つの異なるモノクローナル抗体が得られ、現在利用可能な最も感度の高い酵素アッセイよりも最大10倍高い感度でHMTを検出できました。これらの抗体を使用することで、さまざまなヒトおよびブタ組織におけるHMTの発現と細胞局在を確認することができました。そこでは、酵素の存在が以前に活性測定とHMT mRNA分析から推定されていました。ヒトおよびブタ組織切片の免疫組織化学染色は、HMTがほとんどの哺乳類組織の特定の細胞に局在するサイトゾルタンパク質であることを明確に示しています。 結論：新しいモノクローナル抗体は、人間および他の哺乳類の細胞レベルでのHMTの発現の包括的な定量的評価を可能にするだけでなく、このタンパク質の疾患関連変化の敏感な分析も促進します。

OBJECTIVE: The lack of suitable antibodies for the histamine inactivating enzyme histamine N-methyltransferase (HMT) has so far prevented the direct analysis of HMT proteins in man and other mammals. METHODS: A series of monoclonal antibodies was produced by immunizing mice with human and porcine HMT expressed in vitro. Antibodies were characterized by immunoblotting and immunohistochemical staining. RESULTS: Six different monoclonal antibodies specific for human HMT and four different monoclonal antibodies specific for porcine HMT were obtained that can detect HMT with up to tenfold greater sensitivity than the most sensitive enzymatic assays currently available. Using these antibodies allowed us to confirm the expression and cellular localization of HMT in various human and porcine tissues, where the presence of the enzyme had previously been deduced from activity measurement and HMT mRNA analysis. Immunohistochemical staining of human and porcine tissue sections clearly showed that HMT is a cytosolic protein, which is localized in specific cells of most mammalian tissues. CONCLUSIONS: The new monoclonal antibodies not only allow a comprehensive quantitative evaluation of the expression of HMT at the cellular level in man and other mammals but will also facilitate sensitive analyses of disease-associated alterations of this protein.