胚盤胞段階で染色体モザイクを「マッピング」する手法

この研究の目的は、ヒト胚盤胞内の個々の細胞の包括的な染色体スクリーニング（CCS）を可能にする手法を特定することと、内細胞質量（ICM）と比較して栄養皮皮胚葉の位置の近似とともに特定することでした。この概念実証研究により、胚盤胞段階での染色体モザイクリシズムとモザイシズムが生じるメカニズムの理解を深めることができます。1つの胚盤胞が保持ピペットによって保持され、ICMが除去されました。まだ開催されている間、胚盤胞はさらに象限に生検を受けました。個々の細胞を生検断面から分離するために、切片をカルシウム/マグネシウムを含まない培地で血清と20分間配置しました。保持ピペットを使用して、個々の細胞が分離されるまで切片を吸引しました。各セクションの個々のセルをPCRチューブに配置し、ACGH用に準備しました。合計18個の細胞が分析に使用され、そのうち15個（83.3％）が増幅され、結果が得られ、3個（16.7％）はそうではありませんでした。15個の細胞が栄養皮皮から分離されました。13（86.7％）はACGHの結果を提供し、2（13.3％）は増幅しませんでした。12の細胞は緑地（46、XY）であり、1は複雑な異常（44、XY）であり、単ソミー7、10、11、13、および19、およびトリソミー14、15、および21を示しました。ICMから分離。2はeuploid（46、XY）であり、1は増幅しませんでした。ここでは、胚盤胞の生検を個々の細胞に分離する以前に公開された手法を拡張します。胚盤胞切片はICMの位置に関して生検であったため、各細胞の個々のCCS結果を提示しながら、胚盤胞の仮想画像を再構築することができました。

The purpose of this study was to identify a technique that allows for comprehensive chromosome screening (CCS) of individual cells within human blastocysts along with the approximation of their location in the trophectoderm relative to the inner cell mass (ICM). This proof-of-concept study will allow for a greater understanding of chromosomal mosaicism at the blastocyst stage and the mechanisms by which mosaicism arises. One blastocyst was held by a holding pipette and the ICM was removed. While still being held, the blastocyst was further biopsied into quadrants. To separate the individual cells from the biopsied sections, the sections were placed in calcium/magnesium-free medium with serum for 20 min. A holding pipette was used to aspirate the sections until individual cells were isolated. Individual cells from each section were placed into PCR tubes and prepped for aCGH. A total of 18 cells were used for analysis, of which 15 (83.3%) amplified and provided a result and 3 (16.7%) did not. Fifteen cells were isolated from the trophectoderm; 13 (86.7%) provided an aCGH result, while 2 (13.3%) did not amplify. Twelve cells were euploid (46,XY), while 1 was complex abnormal (44,XY), presenting with monosomy 7, 10, 11, 13, and 19, and trisomy 14, 15, and 21. A total of 3 cells were isolated from the ICM; 2 were euploid (46,XY) and 1 did not amplify. Here, we expand on a previously published technique which disassociates biopsied sections of the blastocyst into individual cells. Since the blastocyst sections were biopsied in regard to the position of the ICM, it was possible to reconstruct a virtual image of the blastocyst while presenting each cell's individual CCS results.