モノクローナル抗体PF-00547659の生理学的に関連する結合親和性定量化in vivoでのin vitroのin vitroのための細胞接着分子分子へ

背景と目的：粘膜アドレスイン細胞接着分子（MADCAM）に対するモノクローナル抗体（PF-00547659）は、可溶性（SMADCAM）とトランス膜（MMADCAM）の両方の標的形式として発現し、抗体標的KDと臨床的誘導体の間の抗体標識KDで30倍以上の差を示しました。後散乱干渉法（BSI）を適用して、生理学的に関連するKD値を獲得し、in vitroおよびin vivo相関（IVIVC）を確立するために使用されました。 実験的アプローチ：BSIを適用して、PF-00547659とバッファーまたはCHO細胞の組換えヒトMADCAMとヒト血清または結腸組織の内因性MADCAMの組換えヒトMADCAMの間でKD値を取得しました。CHO細胞と組織は、膜小胞と可溶性タンパク質を含むホモジネートを得るために最小限に処理されました。さまざまな希釈因子を持つ血清中の一連の結合親和性を使用して、KD、生体内濃度、標的濃度の両方を推定しました。MADCAM濃度もLC-MS/MSを使用して測定されました。 主な結果：BSI測定により、緩衝液と血清中のSMADCAMのKD値が低い（より高い親和性）が明らかになりましたが、CHO、MMADCAM、および組織のSMADCAMのMMADCAMの20倍のKD値（アフィニティが低い）が明らかになりました。BSIはKDを予測し、血清中の生体内では臨床的に由来するKD、生体内、BSIを推定する血清SMADCAM濃度もLC-MS/MSで測定濃度と一致しました。 結論と意味：我々の結果は、生理学的に関連するKD値のBSI測定を使用してIVIVCを確立できることを成功裏に実証しました。BSIの適用は、成功した基本的な薬理学的研究と医薬品開発を大幅に強化するでしょう。

BACKGROUND AND PURPOSE: A monoclonal antibody (PF-00547659) against mucosal addressin cell adhesion molecule (MAdCAM), expressed as both soluble (sMAdCAM) and trans-membrane (mMAdCAM) target forms, showed over 30-fold difference in antibody-target KD between in vitro (Biacore) and clinically derived (KD,in-vivo ) values. Back-scattering interferometry (BSI) was applied to acquire physiologically relevant KD values which were used to establish in vitro and in vivo correlation (IVIVC). EXPERIMENTAL APPROACH: BSI was applied to obtain KD values between PF-00547659 and recombinant human MAdCAM in buffer or CHO cells and endogenous MAdCAM in human serum or colon tissue. CHO cells and tissue were minimally processed to yield homogenate containing membrane vesicles and soluble proteins. A series of binding affinities in serum with various dilution factors was used to estimate both KD,in-vivo and target concentrations; MAdCAM concentrations were also measured using LC-MS/MS. KEY RESULTS: BSI measurements revealed low KD values (higher affinity) for sMAdCAM in buffer and serum, yet a 20-fold higher KD value (lower affinity) for mMAdCAM in CHO, mMAdCAM and sMAdCAM in tissue. BSI predicted KD,in-vivo in serum was similar to clinically derived KD,in-vivo , and the BSI-estimated serum sMAdCAM concentration also matched the measured concentration by LC-MS/MS. CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS: Our results successfully demonstrated that BSI measurements of physiologically relevant KD values can be used to establish IVIVC, for PF-00547659 to MAdCAM despite the lack of correlation when using Biacore measured KD and accurately estimates endogenous target concentrations. The application of BSI would greatly enhance successful basic pharmacological research and drug development.