がん患者の液体および組織におけるハンガヌッツィー・ディーヒャー抗体と抗原のアッセイのためのビオチン化抗体の使用

ヘテロファイルhunganutziu-deicher（HD）抗体および抗原を検出するための改善された酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）および抗原は、さまざまな癌の患者の血清および/または癌組織で頻繁に検出されました。）抗体およびアビジン - ホルセラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート。N-グリコリルネウリミニルラクトシル - セラミド、GM3（NeUGC）ガングリオシドは、馬赤血球膜から精製されました。ELISA手順では、最適な製品形成を与えるために、プラスチックマイクロタイタープレートと190 ngのビオチン化抗体をウェルごとにコーティングするために300 ng GM3（NEUGC）抗原が必要でした。この技術は、阻害により0.6 ngの純粋な化合物と比較して、組織ホモジネートの6 ng抗原を検出できます。チキン抗GM3（NEUGC）抗体はビオチン化抗体を定量的に阻害しましたが、この手順は患者血清のより低い親和性HD抗体を定量化するのに適していませんでした。HD抗原陽性細胞に特異的な免疫染色​​は、陽性組織および鶏肉腸と陰性組織としての鶏肉腸および肺としてのピッグ腸とリンパ節を使用したアビジンビオチン化ペルオキシダーゼ複合体試薬の4マイクログラム/mLビオチン化抗体と200個の希釈剤によるものでした。

An improved enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of heterophile Hanganutziu-Deicher (HD) antibodies and antigens, which are frequently detected in sera and/or cancerous tissues from patients with various cancers was developed using biotinylated chicken anti-GM3(NeuGc) antibody and avidin-horseradish peroxidase conjugate. The N-glycolylneuraminyllactosyl-ceramide, GM3(NeuGc) ganglioside was purified from horse erythrocyte membranes. The ELISA procedure required 300 ng GM3(NeuGc) antigen to coat plastic microtiter plates and 190 ng biotinylated antibody per well to give optimum product formation. The technique could detect 6 ng antigen in tissue homogenate as compared to 0.6 ng of the pure compound by inhibition. Chicken anti-GM3(NeuGc) antibody quantitatively inhibited the biotinylated antibody, however, this procedure was not suitable to quantify lower affinity HD antibody in patient sera. Immunostaining specific for HD antigen-positive cells, in tissue sections was by 4 micrograms/ml biotinylated antibody and 200 dilution of Avidin-biotinylated peroxidase complex reagent using pig intestine and lymph node as positive tissues and chicken intestine and lung as negative tissues.