ヒトインフルエンザウイルスの抗原特性評価のためのウイルススポットマイクロニュートラン化アッセイ

血球凝集阻害（HI）アッセイは、インフルエンザウイルスの抗原特性評価に何十年も使用されてきました。しかし、H3N2サブタイプの最近の季節インフルエンザAウイルスの大部分は、さまざまな種の赤血球を凝集させる能力を失いました。他のA（H3N2）株の血球凝集（HA）活性は一般に、ニューラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルの作用に敏感であり、これはヘマグルチニンではなくニューラミニダーゼがHA活性の原因であることを示しています。これらの発見は、A（H3N2）ワクチン株の抗原特性と選択を複雑にし、代替抗原特性アッセイを求めています。ここでは、ウイルススポットマイクロニュートレーション（MN）アッセイの開発と使用を、HIアッセイの信頼できる堅牢な代替品として説明します。インフルエンザA（H3N2）参照ウイルス株と流行分離株の血清中和は、血清中和力価に対する感染性ウイルス線量の影響を最小限に抑えるために設計された形式で、免疫染色細​​胞単層の自動読み取りによって決定されました。感染の中和は、非常にウイルス複製の速度と細胞間伝播の速度から独立しており、異なるウイルス分離株の比較を促進しました。ウイルススポットMNアッセイのその他の利点には、感染性ウイルスの試験用量の変動に対する相対的な非感受性、自動化された捕獲と残留感染パターンの分析、および標準化された大規模分析との互換性が含まれます。このアッセイを使用して、赤血球を凝集できなかった多くの流行インフルエンザA（H3N2）株は、抗原的に容易に特徴付けられました。

The hemagglutination inhibition (HI) assay has been used for the antigenic characterization of influenza viruses for decades. However, the majority of recent seasonal influenza A viruses of the H3N2 subtype has lost the capacity to agglutinate erythrocytes of various species. The hemagglutination (HA) activity of other A(H3N2) strains is generally sensitive to the action of the neuraminidase inhibitor oseltamivir, which indicates that the neuraminidase and not the hemagglutinin is responsible for the HA activity. These findings complicate the antigenic characterization and selection of A(H3N2) vaccine strains, calling for alternative antigenic characterization assays. Here we describe the development and use of the ViroSpot microneutralization (MN) assay as a reliable and robust alternative for the HI assay. Serum neutralization of influenza A(H3N2) reference virus strains and epidemic isolates was determined by automated readout of immunostained cell monolayers, in a format designed to minimize the influence of infectious virus doses on serum neutralization titers. Neutralization of infection was largely independent from rates of viral replication and cell-to-cell transmission, facilitating the comparison of different virus isolates. Other advantages of the ViroSpot MN assay include its relative insensitivity to variation in test dose of infectious virus, automated capture and analyses of residual infection patterns, and compatibility with standardized large scale analyses. Using this assay, a number of epidemic influenza A(H3N2) strains that failed to agglutinate erythrocytes, were readily characterized antigenically.