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Journal of clinical laboratory analysis2017Sep01Vol.31issue(5)

ヒト血清中のテストステロン、アンドロステンジオン、およびデヒドロエピアンドロステロンの測定のための迅速かつ単純な液体クロマトグラフィタンデム質量分析法

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

背景:アンドロゲンのアッセイは、アンドロゲン関連の内分泌疾患の鑑別診断に重要な役割を果たします。成人における血清テストステロン、アンドロステンジオン、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)の同時測定のための小さなサンプル量と単純なサンプル調製を備えた、迅速かつ単純な液体クロマトグラフィータンデム質量分析(LC-MS/MS)法を開発しました。 方法:マトリックス効果の緩和とタンパク質沈殿のために、メタノールで調製された200μlの内部標準溶液で100μlの血清をスパイクしました。得られた上清をLC-MS/MS分析に直接使用しました。 結果:検証された方法は、0.992を超える線形相関係数を持つ各分析物に対して優れた線形性を示します。3つの濃度での総精度は、テストステロンで15.66%、8.81%、4.34%、アンドロステンジオンで13.60%、6.62%、5.96%、DHEAでそれぞれ14.35%、15.34%、13.92%でした。回復、キャリーオーバー、マトリックス効果、および分析的特異性も、このLC-MS/MSメソッドを順調に検証して、満足した結果を実現しました。参照間隔(5〜95センチ)も成人男性と女性向けに確立されました。 ディスカッション:この方法では、最小限の手動サンプル操作とサンプル量の要件を最小限に抑えた臨床研究所のステロイドの定量化のためのより簡単な実装を提供します。 結論:臨床検査室におけるステロイドアッセイの信頼性が高く、単純で、敏感で潜在的な方法がLC-MS/MSによって成功裏に開発されたことが実証されています。

背景:アンドロゲンのアッセイは、アンドロゲン関連の内分泌疾患の鑑別診断に重要な役割を果たします。成人における血清テストステロン、アンドロステンジオン、デヒドロエピアンドロステロン(DHEA)の同時測定のための小さなサンプル量と単純なサンプル調製を備えた、迅速かつ単純な液体クロマトグラフィータンデム質量分析(LC-MS/MS)法を開発しました。 方法:マトリックス効果の緩和とタンパク質沈殿のために、メタノールで調製された200μlの内部標準溶液で100μlの血清をスパイクしました。得られた上清をLC-MS/MS分析に直接使用しました。 結果:検証された方法は、0.992を超える線形相関係数を持つ各分析物に対して優れた線形性を示します。3つの濃度での総精度は、テストステロンで15.66%、8.81%、4.34%、アンドロステンジオンで13.60%、6.62%、5.96%、DHEAでそれぞれ14.35%、15.34%、13.92%でした。回復、キャリーオーバー、マトリックス効果、および分析的特異性も、このLC-MS/MSメソッドを順調に検証して、満足した結果を実現しました。参照間隔(5〜95センチ)も成人男性と女性向けに確立されました。 ディスカッション:この方法では、最小限の手動サンプル操作とサンプル量の要件を最小限に抑えた臨床研究所のステロイドの定量化のためのより簡単な実装を提供します。 結論:臨床検査室におけるステロイドアッセイの信頼性が高く、単純で、敏感で潜在的な方法がLC-MS/MSによって成功裏に開発されたことが実証されています。

BACKGROUND: The assay of androgens plays an important role for the differential diagnosis of androgen-related endocrine diseases. We developed a rapid and simple liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method with small sample volume and simple sample preparation for simultaneous determination of serum testosterone, androstenedione and dehydroepiandrosterone (DHEA) in adults. METHODS: We spiked 100 μL of serum with 200 μL of internal standard solution, which was prepared in methanol, for matrix effect relief and protein precipitation. The obtained supernatant was used directly for LC-MS/MS analysis. RESULTS: The validated method exhibits excellent linearity for each analyte with linear correlation coefficient above 0.992. The total precisions at three concentrations were 15.66%, 8.81% and 4.34% for testosterone, 13.60%, 6.62% and 5.96% for androstenedione, 14.35%, 15.34% and 13.92% for DHEA, respectively. Recovery, carryover, matrix effect and analytical specificity were also performed for well validation of this LC-MS/MS method with satisfied results. Reference intervals (5th-95th centile) were also established for adult men and women. DISCUSSION: This method offers simpler implement for quantification of steroids in clinical laboratories with minimal manual sample manipulation and minimized sample volume requirements. CONCLUSION: It is demonstrated that a reliable, simple, sensitive and potential method for steroids assay in clinical laboratories had been successfully developed by LC-MS/MS.

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