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分子技術を使用した薬物感受性試験は、薬物耐性マイコバクテリウム結核の同定を強化することができます2つのマルチプレックスリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（QPCR）アッセイは、イソニアジド（KATGS315T、INHA-15c→T）およびリフンパンピン（KATGS315T）およびリフンパンピン（KATGS315T）およびリフンパンピン（KATGS315T）の同定を開発しました（QPCR）RPOBS531L）。QPCRの種の特異性を評価するために、マイコバクテリア文化（BCCM/ITM）の公開コレクションから17種に属する31の非尿性マイコバクテリア（NTM）参照株を選択しました。さらに、標的遺伝子の他の変異を伴う17のイソニアジドおよび/またはリファンピシン耐性株をテストして、突然変異の特異性を評価しました。すべての標的変異の検出の限界は、20菌/反応でした。多重1は、野生型（WT）、MUT KATGS315T、およびMUT RPOBS531Lでそれぞれ90％、95％、および100％効率を示しました。一方、Multiplex 2は、それぞれWT、MUT INHA-15、およびMUT RPOBH526Yで97％、94％、および90％の効率を示しました。標的遺伝子に他の変異を提示した17の株のうち3つがリファンピシン耐性として特定され、3/31 NTMのみがRPOBL531および/またはKATGT315変異体と同様の融解温度を示しました。したがって、提案された特定の結核検出のカスケードとそれに続く薬剤耐性試験により、KATGS315T、RPOBS531L、RPOBH526Y、およびINHA-15検出の感度がそれぞれ100％、100％、100％、および96％を示しました。それぞれ98％、95％、100％、および100の特異性。
分子技術を使用した薬物感受性試験は、薬物耐性マイコバクテリウム結核の同定を強化することができます2つのマルチプレックスリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（QPCR）アッセイは、イソニアジド（KATGS315T、INHA-15c→T）およびリフンパンピン（KATGS315T）およびリフンパンピン（KATGS315T）およびリフンパンピン（KATGS315T）の同定を開発しました（QPCR）RPOBS531L）。QPCRの種の特異性を評価するために、マイコバクテリア文化（BCCM/ITM）の公開コレクションから17種に属する31の非尿性マイコバクテリア（NTM）参照株を選択しました。さらに、標的遺伝子の他の変異を伴う17のイソニアジドおよび/またはリファンピシン耐性株をテストして、突然変異の特異性を評価しました。すべての標的変異の検出の限界は、20菌/反応でした。多重1は、野生型（WT）、MUT KATGS315T、およびMUT RPOBS531Lでそれぞれ90％、95％、および100％効率を示しました。一方、Multiplex 2は、それぞれWT、MUT INHA-15、およびMUT RPOBH526Yで97％、94％、および90％の効率を示しました。標的遺伝子に他の変異を提示した17の株のうち3つがリファンピシン耐性として特定され、3/31 NTMのみがRPOBL531および/またはKATGT315変異体と同様の融解温度を示しました。したがって、提案された特定の結核検出のカスケードとそれに続く薬剤耐性試験により、KATGS315T、RPOBS531L、RPOBH526Y、およびINHA-15検出の感度がそれぞれ100％、100％、100％、および96％を示しました。それぞれ98％、95％、100％、および100の特異性。
Drug susceptibility testing using molecular techniques can enhance the identification of drug-resistant Mycobacterium tuberculosis Two multiplex real-time polymerase chain reaction (qPCR) assays were developed to detect the most common resistance-associated mutations to isoniazid (katGS315T, inhA-15C → T), and rifampicin (rpoBH526Y and rpoBS531L). To assess the species specificity of the qPCR, we selected 31 nontuberculous mycobacteria (NTM) reference strains belonging to 17 species from the public collection of mycobacterial cultures (BCCM/ITM). Additionally, we tested 17 isoniazid and/or rifampicin-resistant strains with other mutations in the target genes to assess mutation specificity. The limit of detection for all the targeted mutations was 20 bacilli/reaction. Multiplex 1 showed 90%, 95%, and 100% efficiency for wild type (WT), Mut katGS315T, and Mut rpoBS531L, respectively; whereas Multiplex 2 showed 97%, 94%, and 90% efficiency for WT, Mut inhA-15, and Mut rpoBH526Y, respectively. Three of 17 strains that presented other mutations in the target genes were identified as rifampicin resistant and only 3/31 NTM showed a similar melting temperature to rpoBL531 and/or katGT315 mutants. Thus, our proposed cascade of specific tuberculosis detection followed by drug resistance testing showed sensitivities for katGS315T, rpoBS531L, rpoBH526Y, and inhA-15 detection of 100%, 100%, 100%, and 96%, respectively; and specificities of 98%, 95%, 100%, and 100, respectively.
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