糖尿病患者における口腔洗浄標本濃度におけるカンジダ種の同定のための敏感で迅速なマルチプレックスポリメラーゼ連鎖反応

目的：口腔カンジダ症は、糖尿病患者で頻繁に認識されており、カンジダアルビカンス、カンジダ麻痺、カンジダグラブラタ、カンジダトロピカリスなどの複数の病原体に関連しています。この研究の目的は、糖尿病患者における4つの経口カンジダ病原体を特定するための迅速な診断ツールとしてのマルチプレックスポリメラーゼ連鎖反応の有用性を評価することでした。 材料と方法：マルチプレックスPCRは、濃縮された経口すすぎサンプルで4つのカンジダ種を特定するために最適化されました。酵母ゲノムのITS1およびITS2領域を標的とする共通のリバースプライマー、ITS4および4種特異的な前方プライマーを使用しました。種固有の単一アンプリコンは、アガロースゲル電気泳動によって検出されました。マルチプレックスPCRのパフォーマンス効果を表現型の同定と比較しました。 結果：100個の経口すすぎサンプルのうち、72人が培養陽性であり、これら43人のうち、口腔カンジダ感染のリスクがありました（> 600CFU/mL）。C. albicans、C。parapsilosis、およびC. tropicalisを含む複数のカンジダ種が、口腔カンジダ感染のリスクがある22のサンプルで同定されました。合計で、85人の患者がマルチプレックスPCRによってカンジダに対して陽性であり、そのうち49人が複数のカンジダ種を持っていました。43個のコロニー標本はすべて、多重PCRによって陽性でした。C. albicansは、最も主要な生物（75/85）であり、続いてC. parapsilosis（47/85）、C。tropicalis（17/85）およびC. glabrata（6/85）が続きました。複数の種を持つ標本では、2つの最も一般的な生物はC. albicansとC. parapsilosisでした。多重PCRは、10個のカンジダ細胞/mLの経口すすぎサンプルの感度をもたらしました。 結論：マルチプレックスPCRは、経口すすぎ標本の複数のカンジダ種を識別する上で、表現型の識別方法よりも迅速で敏感で特異的であることがわかりました。

OBJECTIVES: Oral candidiasis is being frequently recognized in patients with diabetes, and is associated with multiple pathogens including Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida glabrata and Candida tropicalis. The aim of this study was to evaluate a usefulness of a Multiplex Polymerase Chain Reaction as a rapid diagnostic tool for identification of four oral Candida pathogens in patients with diabetes. MATERIALS AND METHODS: A multiplex PCR was optimized to identify four Candida species in concentrated oral rinse samples. Common reverse primer, ITS4 and four species-specific forward primers targeting ITS1 and ITS2 regions of yeast genome were used. Species-specific single amplicon were detected by agarose gel electrophoresis. Performance efficacy of multiplex PCR was compared with phenotypic identification. RESULTS: Out of 100 oral rinse samples, 72 were culture positive and of these 43 were at risk of oral Candida infection (>600cfu/ml). Multiple Candida species including C. albicans, C. parapsilosis and C. tropicalis were identified in 22 samples which had risk of oral Candida infection. In total, 85 patients were positive for Candida by multiplex PCR and of them 49 had multiple Candida species. All 43 colonized specimens were also positive by multiplex PCR. C. albicans was the most predominant organism (75/85) followed by C. parapsilosis (47/85), C. tropicalis (17/85) and C. glabrata (6/85). In specimens with multiple species, the two most common organisms were C. albicans and C. parapsilosis. Multiplex PCR yielded a sensitivity of 10 Candida cells/ml of oral rinse sample. CONCLUSIONS: Multiplex PCR is found to be rapid, sensitive and specific than phenotypic identification methods in discriminating multiple Candida species in oral rinse specimens.