in vitro tau凝集アッセイのフィブリラー産物の検出および定量化方法

アルツハイマー病は、タウタンパク質の細胞内誤折りたたみと凝集によって部分的に特徴付けられます。小さなオリゴマーから大きなフィラメントまでのサイズの範囲の凝集体は、疾患診断と病期分類のマーカー、疾患伝播の潜在的なベクター、および神経毒性の候補源です。ここでは、in vitroのモノマーフルレングスのタウ前駆体からの糸状形態とクロスβシート構造を特徴とする大きなタウ凝集体を合成するためのプロトコルを提示します。また、チオフラビン色素結合、フィルタートラップ、および透過型電子顕微鏡法を介したそれらの検出と定量化についても説明します。これらの方法は、ハイスループット機能を必要とするアプリケーションと、凝集メカニズムの高解像度分析を必要とするアプリケーションをカバーしています。

Alzheimer's disease is characterized in part by the intracellular misfolding and aggregation of tau protein. The aggregates, which range in size from small oligomers to large filaments, are markers for disease diagnosis and staging, potential vectors for disease propagation, and candidate sources of neurotoxicity. Here we present protocols for synthesizing large tau aggregates characterized by filamentous morphology and cross-β-sheet structure from monomeric full-length tau precursors in vitro. We also describe their detection and quantification through thioflavin dye binding, filter trap, and transmission electron microscopy methods. These methods cover applications requiring high-throughput capability as well as those requiring high-resolution analysis of aggregation mechanism.