ポリメラーゼ連鎖反応を使用した培養上清から直接マイコプラズマ汚染の検出

マイコプラズマを含まない細胞培養を確保することは、実験的アーティファクトと偽の結果につながる細胞特性に深刻な影響を与えるため、主に重要です。マイコプラズマ検出のためのさまざまな方法が持続します。メソッドポリメラーゼ連鎖反応（PCR）の配列全体のうち、非常に敏感で具体的で迅速であるため、最も好まれています。PCRベースの検出手順には、細胞培養上清コレクション、DNA分離、PCRの3つのステップが含まれます。この手順を変更して、DNA抽出を必要とせずに細胞培養上清をPCRに直接使用できるようにしました。マイコプラズマDNAの喪失が防止され、マイコプラズマ汚染のレベルが非常に低い場合、この損失がより重要になるため、この変更により手順がより迅速かつ敏感になります。

Ensuring mycoplasma-free cell culture is of prime importance as they severely affect cellular characteristics leading to experimental artefacts and spurious results. Various methods persist for mycoplasma detection; out of the whole array of methods polymerase chain reaction (PCR) is the most favoured one because it is highly sensitive, specific and quick. The PCR-based detection procedure involves three steps: cell culture supernatant collection, DNA isolation, and PCR. We have modified this procedure so that cell culture supernatant can directly be used for PCR without the need for DNA extraction. This modification makes the procedure quicker and more sensitive because loss of mycoplasma DNA is prevented and this loss becomes more significant when the level of mycoplasma contamination is very low.