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背景：短いラグウィード（Ambrosia artemisiifolia）アレルギーは、年間3,600万人以上に影響を与えます。ラグウィード花粉粒子は、水和または空気の電気条件の変化時に呼吸可能なサイズのサブポレン粒子（SPP）を放出します。この研究の目的は、短いラグウィードSPPおよび総花粉タンパク質抽出物（TOT）のプロテオームとアレルゴムを特徴付け、短いラグウィード花粉感受性患者の血清を使用した標準的な水性花粉タンパク質抽出物（APE）の効果と比較することでした。 方法：定量的2Dゲルベースおよびショットガンプロテオミクス、1Dおよび2D免疫ブロッティング、および定量的ELISAが適用されました。新規SPP抽出および準備プロトコルにより、適切なサンプル調製と定量的プロテオミクスによるさらに下流分析が可能になりました。 結果：SPP画分には、アレルゴムの最高割合（94％）が含まれており、マイナーAMB A 4および主要なAMB A 1アレルゲン、およびユニークなナードデヒドロゲナーゼとして最大量が含まれていました。APEはAMB A 6、AMB A 5、AMB A 3で最も裕福であり、TOT画分はAMB A 8アレルゲン（それぞれ89％と83％）で最も豊かでした。アレルギー性効力は、テストされた3つの画分の間でよく相関しており、1D免疫ブロットは、TOTおよびAPEと比較してSPPに対するIgE反応性のわずかな優勢を示しています。しかし、ELISAで最も強いIgE結合はAPEに対して認められました。新しいアレルギー性候補であるホスホグリセ酸ミューターゼとホスホグルコムターゼは、3つの花粉画分すべてで同定されました。Enolase、UTP-Glucose-1-リン酸尿素尿酸塩トランスフェラーゼおよびポリガラクトロナーゼは、前述のように、短いラグウィード花粉の新規アレルゲンとしてSPPおよびTOT画分で観察されました。 結論と臨床的関連性：私たちは、完全なメジャー（AMB A 1および11）およびほぼすべてのマイナー（AMB A 3、4、5、6、8、9）の短いラグウィード花粉アレルゲンレパートリーとNADHオキシダーゼが存在することを実証しました。SPPは、短いラグウィードに対するアレルギー感作におけるSPPの重要な役割を強調しています。
背景：短いラグウィード（Ambrosia artemisiifolia）アレルギーは、年間3,600万人以上に影響を与えます。ラグウィード花粉粒子は、水和または空気の電気条件の変化時に呼吸可能なサイズのサブポレン粒子（SPP）を放出します。この研究の目的は、短いラグウィードSPPおよび総花粉タンパク質抽出物（TOT）のプロテオームとアレルゴムを特徴付け、短いラグウィード花粉感受性患者の血清を使用した標準的な水性花粉タンパク質抽出物（APE）の効果と比較することでした。 方法：定量的2Dゲルベースおよびショットガンプロテオミクス、1Dおよび2D免疫ブロッティング、および定量的ELISAが適用されました。新規SPP抽出および準備プロトコルにより、適切なサンプル調製と定量的プロテオミクスによるさらに下流分析が可能になりました。 結果：SPP画分には、アレルゴムの最高割合（94％）が含まれており、マイナーAMB A 4および主要なAMB A 1アレルゲン、およびユニークなナードデヒドロゲナーゼとして最大量が含まれていました。APEはAMB A 6、AMB A 5、AMB A 3で最も裕福であり、TOT画分はAMB A 8アレルゲン（それぞれ89％と83％）で最も豊かでした。アレルギー性効力は、テストされた3つの画分の間でよく相関しており、1D免疫ブロットは、TOTおよびAPEと比較してSPPに対するIgE反応性のわずかな優勢を示しています。しかし、ELISAで最も強いIgE結合はAPEに対して認められました。新しいアレルギー性候補であるホスホグリセ酸ミューターゼとホスホグルコムターゼは、3つの花粉画分すべてで同定されました。Enolase、UTP-Glucose-1-リン酸尿素尿酸塩トランスフェラーゼおよびポリガラクトロナーゼは、前述のように、短いラグウィード花粉の新規アレルゲンとしてSPPおよびTOT画分で観察されました。 結論と臨床的関連性：私たちは、完全なメジャー（AMB A 1および11）およびほぼすべてのマイナー（AMB A 3、4、5、6、8、9）の短いラグウィード花粉アレルゲンレパートリーとNADHオキシダーゼが存在することを実証しました。SPPは、短いラグウィードに対するアレルギー感作におけるSPPの重要な役割を強調しています。
BACKGROUND: Short ragweed (Ambrosia artemisiifolia) allergies affect more than 36 million people annually. Ragweed pollen grains release subpollen particles (SPP) of respirable size upon hydration or a change in air electrical conditions. The aim of this study was to characterize the proteomes and allergomes of short ragweed SPP and total pollen protein extract (TOT), and compare their effects with those of standard aqueous pollen protein extract (APE) using sera from short ragweed pollen-sensitized patients. METHODS: Quantitative 2D gel-based and shotgun proteomics, 1D and 2D immunoblotting, and quantitative ELISA were applied. Novel SPP extraction and preparation protocols enabled appropriate sample preparation and further downstream analysis by quantitative proteomics. RESULTS: The SPP fraction contained the highest proportion (94%) of the allergome, with the largest quantities of the minor Amb a 4 and major Amb a 1 allergens, and as unique, NADH dehydrogenases. APE was the richest in Amb a 6, Amb a 5 and Amb a 3, and TOT fraction was the richest in the Amb a 8 allergens (89% and 83% of allergome, respectively). Allergenic potency correlated well among the three fractions tested, with 1D immunoblots demonstrating a slight predominance of IgE reactivity to SPP compared to TOT and APE. However, the strongest IgE binding in ELISA was noted against APE. New allergenic candidates, phosphoglycerate mutase and phosphoglucomutase, were identified in all the three pollen fractions. Enolase, UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase and polygalacturonase were observed in SPP and TOT fractions as novel allergens of the short ragweed pollen, as previously described. CONCLUSION AND CLINICAL RELEVANCE: We demonstrated that the complete major (Amb a 1 and 11) and almost all minor (Amb a 3, 4, 5, 6, 8 and 9) short ragweed pollen allergen repertoire as well as NADH oxidases are present in SPP, highlighting an important role for SPP in allergic sensitization to short ragweed.
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