半減期を延長し、安定性を高めた「Fc-Silenced」IgG1フォーマット

IgG FCの複数の突然変異の組み合わせは、モノクローナル抗体治療薬の望ましい生物学的結果に適合するために、免疫エフェクター機能またはIgG血清持続性を調整することを特徴づけられています。FC（特にCH2ドメイン）に変異を導入することの意図しない結果は、凝集傾向の増加、製造可能性の低下、溶解度の低下と相関する生物物理学的安定性の低下になる可能性があります。本明細書では、2セットのCH2変異「TM」（L234F/L235E/P331S）および「YTE」（M252Y/S254T/T256E）の2セットのCH2変異の2セットが、積極的な受容体バインディングを欠く抗体形成を生成するために組み合わせた場合、IgG立体構造およびコロイドの安定性の変化を特徴付けています。そして、拡張された半減期を展示します。熱安定性が大幅に低下したことに加えて、CH2におけるTM-YTEの立体構造の柔軟性が高まり、自己関連の増加、溶解度と凝集プロファイルが低いことが観察されます。これらの特性を改善するために、熱安定性に関するTM-YTE内の個々の変異の寄与を分析し、熱安定性を高める新しい突然変異を置き換えました。1つの新しい組み合わせ、FQQ-YTE（L234F/L235Q/K322Q/M252Y/S254T/T256E）は、立体配座とコロイドの安定性を大幅に改善し、TM-YTEと同じ生物学的活性を保持することがわかった（拡張半減期と欠如の欠如抗体依存性細胞媒介細胞毒性および補体依存性細胞毒性活性）。私たちのエンジニアリングアプローチは、Tailared Biological活性を保持しながら、FC変異を含む抗体の発達性を改善する方法を提供します。

Multiple mutation combinations in the IgG Fc have been characterized to tailor immune effector function or IgG serum persistence to fit desired biological outcomes for monoclonal antibody therapeutics. An unintended consequence of introducing mutations in the Fc (particularly the CH2 domain) can be a reduction in biophysical stability which can correlate with increased aggregation propensity, poor manufacturability, and lower solubility. Herein, we characterize the changes in IgG conformational and colloidal stability when 2 sets of CH2 mutations "TM" (L234F/L235E/P331S) and "YTE" (M252Y/S254T/T256E) are combined to generate an antibody format lacking immune receptor binding and exhibiting extended half-life. In addition to significantly lowered thermostability, we observe greater conformational flexibility for TM-YTE in CH2, increased self-association, and poorer solubility and aggregation profiles. To improve these properties, we dissected the contributions of individual mutations within TM-YTE on thermostability and substituted destabilizing mutations with new mutations that raise thermostability. One novel combination, FQQ-YTE (L234F/L235Q/K322Q/M252Y/S254T/T256E), had significantly improved conformational and colloidal stability, and was found to retain the same biological activities as TM-YTE (extended half-life and lack of antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity and complement-dependent cytotoxicity activity). Our engineering approach offers a way to improve the developability of antibodies containing Fc mutations while retaining tailored biological activity.