ラミニンの神経突起促進活性のシュワノーマ細胞由来阻害剤

ラットRN22シュワンノーマ細胞条件付き培地からのラミニンプロテオグリカン複合体の精製中に、神経突起促進活性を欠くラミニンが豊富な画分が得られました。いくつかの発生源からのラミニンは強力な神経突起促進活性を持っていることが知られているため、この結果は、このラミニンが不活性であるか、その活性が関連する分子によって何らかの形で隠されていることを示唆しました。後者の可能性は、不活性なラミニン含有画分が活性ラミニン含有画分を阻害したというデモによって支持されました。この阻害活性は、イオン交換クロマトグラフィーと等菌遠心分離を使用して部分的に精製されました。精製された材料は、カチオン性樹脂に対する高い親和性、高い浮力密度、電気泳動ゲル上の大きなヘテロ化外観、無機硫酸塩との標識能力、トリプシンおよびグリコサミノグリカンのlyaseに感受性、および熱の安定性に基づいてプロテオグリカンを含みました。その活性を定義することを目的とした治療後、阻害剤を監視するために、定量的なin vitroバイオアッセイを使用しました。分離されたシュワノーマ由来の阻害剤（a）は、精製ラット、マウス、およびヒトラミニンの神経突起促進活性を阻害します。（b）溶液中のラミニンに提示されるか、阻害剤またはラミニンが培養基板に結合した後にアクティブであるかどうか。（c）基骨からラミニンを置換することによって作用しません。（d）ポリクローナルおよびモノクローナル抗ラミニンまたはポリクローナル抗エンタクチン抗体により、神経突起促進ラミニン基質への結合を防ぐことができます。（e）プロテアーゼまたはグリコサミノグリカンリアーゼによって廃止されますが、熱によっては廃止されます。上記の結果は、ラミニンの神経突起促進活性が、プロテオグリカンおよびエルセクチンとの関連を通じて調節されることを示唆しています。

During the purification of laminin-proteoglycan complexes from rat RN22 Schwannoma cell-conditioned medium, a laminin-rich fraction was obtained which lacked neurite-promoting activity. Since laminin from several sources is known to have potent neurite-promoting activity, this result suggested that either this laminin was inactive or its activity was somehow masked by associated molecule(s). The latter possibility was supported by the demonstration that the inactive laminin-containing fraction inhibited active laminin-containing fractions. This inhibitory activity was partially purified by using ion exchange chromatography and isopycnic centrifugation. The purified material contained proteoglycan based on its high affinity for cationic resin, high buoyant density, large heterodisperse appearance on electrophoretic gels, ability to label with inorganic sulfate, sensitivity to trypsin and glycosaminoglycan lyases, and heat stability. A quantitative in vitro bioassay was used to monitor the inhibitor after treatments aimed at defining its activity. The isolated Schwannoma-derived inhibitor (a) inhibits the neurite-promoting activity of purified rat, mouse, and human laminin; (b) is active whether presented to laminin in solution or after either the inhibitor or laminin is first bound to the culture substratum; (c) does not act by displacing laminin from the substratum; (d) can be prevented from binding to neurite-promoting laminin substrates by polyclonal and monoclonal anti-laminin or polyclonal anti-entactin antibodies; and (e) is abolished by proteases or glycosaminoglycan lyases but not by heat. The above results suggest that the neurite-promoting activity of laminin is subject to regulation through association with a proteoglycan and entactin.