補体C9結合部位としての卵巣ビトロネクチンのセカンドアルギニン - グリシン - アスパラギン酸モチーフと細菌感染におけるその意味の同定

血液および細胞外マトリックスの多機能タンパク質であるビトロネクチン（VN）は、補体C9と相互作用します。この相互作用は、自然免疫を調節する可能性があります。VN-C9の相互作用の詳細は限られています。VN-C9の相互作用は、ヤギの相同系を採用し、3つの異なるアッセイでC9へのVN結合を観察することにより評価されました。組換え断片を使用して、C9結合をVNのN末端にマッピングしました。VNの2番目のアルギニングリシンアスパラギン酸（RGD-2）配列（RGD-2）を変更するために、部位指示された突然変異誘発を実施しました。RGD-2でRをGまたはDに変更すると、C9へのVN結合が有意に減少しましたが、最初のRGDモチーフ（RGD-1）でRの変化はC9へのVN結合に影響を与えませんでした。これらの結果は、ヤギVNのRGD-2がC9結合に関与していることを意味します。競合結合アッセイでは、可溶性RGDペプチドの存在はC9へのVN結合を阻害しましたが、ヘパリンは効果がありませんでした。C9へのVN結合は、細菌の病因の観点からも評価されました。大腸菌成長の血清依存性阻害は、VNまたはそのn-fragmentがアッセイに含まれている場合、有意に回復しました。C9結合をサポートしていないCフラグメントは、おそらく他の血清成分を介して、細菌成長の血清依存性阻害を部分的に無効にしました。

Vitronectin (Vn), a multifunctional protein of blood and extracellular matrix, interacts with complement C9. This interaction may modulate innate immunity. Details of Vn-C9 interactions are limited. Vn-C9 interactions were assessed by employing a goat homologous system and observing Vn binding to C9 in three different assays. Using recombinant fragments, C9 binding was mapped to the N-terminus of Vn. Site directed mutagenesis was performed to alter the second arginine glycine aspartic acid (RGD) sequence (RGD-2) of Vn. Changing R to G or D to A in RGD-2 caused significant decrease in Vn binding to C9 whereas changing of R to G in the first RGD motif (RGD-1) had no effect on Vn binding to C9. These results imply that the RGD-2 of goat Vn is involved in C9 binding. In a competitive binding assay, the presence of soluble RGD peptide inhibited Vn binding to C9 whereas heparin had no effect. Vn binding to C9 was also evaluated in terms of bacterial pathogenesis. Serum dependent inhibition of Escherichia coli growth was significantly reverted when Vn or its N-fragment were included in the assay. The C-fragment, which did not support C9 binding, also partly nullified serum-dependent inhibition of bacterial growth, probably through other serum component(s).