金魚中のグレリンOアシルトランスフェラーゼ（ヤギ）の特性評価（Carassius auratus）

グレリンは、アシル化で翻訳後に修飾された唯一の既知のホルモンです。この修飾は、グレリンの生理学的効果のほとんどにとって重要であり、ポリトピック酵素グレリンO-アシルトランスフェラーゼ（ヤギ）によって触媒されます。この研究の目的は、硬骨魚モデルの金魚（Carassius auratus）のヤギを特徴付けることでした。まず、完全長cDNA配列は、RT-PCRとcDNAエンド法の迅速な増幅によって得られました。それぞれ1491と1413 bpの2つの非常に相同性cDNA、Goat-V1とGoat-V2という名前の2つのcDNAが同定されました。推定されたタンパク質配列（それぞれ393および367アミノ酸）は、それぞれ11と9の膜貫通領域を提示すると予測されており、どちらも触媒作用に関与することが提案されている2つの保存された重要な残基を含みます：アスパラギン273とヒスチジン304。ヤギmRNAの形態は、同様の広範な組織分布を示しており、胃腸管と生殖腺で最も高い発現があり、脳、下垂、肝臓、脂肪組織ではかなりの発現があります。腸切片の免疫染色は、腸粘膜にヤギ免疫反応性細胞の存在を示し、その一部はグレリンと共局在しています。in vitroアプローチを使用して、アシル化されたグレリンは、培養腸のヤギ遺伝子とタンパク質レベルを時間依存的にダウンレギュレートすることが観察されました。最後に、視床下部、下垂体および腸内球のヤギmRNA発現のリズミカルな振動が、真夜中に摂取された金魚の腸内球体を発見しましたが、深夜には発見されました。一緒に、これらの発見はヤギを特徴付ける新しいデータを報告し、魚のグレリン作動系に関する新しい情報を提供します。

Ghrelin is the only known hormone posttranslationally modified with an acylation. This modification is crucial for most of ghrelin's physiological effects and is catalyzed by the polytopic enzyme ghrelin O-acyltransferase (GOAT). The aim of this study was to characterize GOAT in a teleost model, goldfish (Carassius auratus). First, the full-length cDNA sequence was obtained by RT-PCR and rapid amplification of cDNA ends methods. Two highly homologous cDNAs of 1491 and 1413 bp, respectively, named goat-V1 and goat-V2 were identified. Deduced protein sequences (393 and 367 amino acids, respectively) are predicted to present 11 and 9 transmembrane regions, respectively, and both contain two conserved key residues proposed to be involved in catalysis: asparagine 273 and histidine 304. RT-qPCR revealed that both forms of goat mRNAs show a similar widespread tissue distribution, with the highest expression in the gastrointestinal tract and gonads and less but considerable expression in brain, pituitary, liver and adipose tissue. Immunostaining of intestinal sections showed the presence of GOAT immunoreactive cells in the intestinal mucosa, some of which colocalize with ghrelin. Using an in vitro approach, we observed that acylated ghrelin downregulates GOAT gene and protein levels in cultured intestine in a time-dependent manner. Finally, we found a rhythmic oscillation of goat mRNA expression in the hypothalamus, pituitary and intestinal bulb of goldfish fed at midday, but not at midnight. Together, these findings report novel data characterizing GOAT, and offer new information about the ghrelinergic system in fish.