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r.cfr9iの切断特異性はCであると判断されましたが、M.CFR9iのメチル化特異性はC4MCCGGGでした。MSPI、HPAII、SMAI、XMAI、およびCFR9I制限の作用は、非メチル化親D（GGACCCGGGGTCC）ドデカヌクレオチドデュプレックスと、CCCGGGGのCCCGG順序での5MCのすべての可能な置換のいずれかを含むオリゴヌクレオチド二重鎖のセットであり、5MCとは対照的に、4MCメチル化により、CCCGGGサイトが実質的にすべての調査対象のエンドヌクレアーゼに耐性があることがわかりました。制限エンドヌクレアーゼによるメチル化基質の切断について説明します。
r.cfr9iの切断特異性はCであると判断されましたが、M.CFR9iのメチル化特異性はC4MCCGGGでした。MSPI、HPAII、SMAI、XMAI、およびCFR9I制限の作用は、非メチル化親D（GGACCCGGGGTCC）ドデカヌクレオチドデュプレックスと、CCCGGGGのCCCGG順序での5MCのすべての可能な置換のいずれかを含むオリゴヌクレオチド二重鎖のセットであり、5MCとは対照的に、4MCメチル化により、CCCGGGサイトが実質的にすべての調査対象のエンドヌクレアーゼに耐性があることがわかりました。制限エンドヌクレアーゼによるメチル化基質の切断について説明します。
The cleavage specificity of R.Cfr9I was determined to be C decreases CCGGG whereas the methylation specificity of M.Cfr9I was C4mCCGGG. The action of MspI, HpaII, SmaI, XmaI and Cfr9I restriction endonucleases on an unmethylated parent d(GGACCCGGGTCC) dodecanucleotide duplex and a set of oligonucleotide duplexes, containing all possible substitutions of either 4mC or 5mC for C in the CCCGGG sequence, was investigated. It was found that 4mC methylation, in contrast to 5mC, renders the CCCGGG site resistant to practically all the investigated endonucleases. The cleavage of methylated substrates with restriction endonucleases is discussed.
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