大腸菌からのヒグロマイシンB耐性マーカーに基づくアスペルギルスの変換

アスペルギルス形質転換体の選択のための新しい、異種の支配的なマーカーについて説明します。このマーカーは、大腸菌ゆるいハイグロマイシンB（HMB）ホスホトランスフェラーゼ遺伝子（HPH）に基づいています。HPH遺伝子の発現は、A。nidulansGPDおよびTRPC発現信号によって制御されます。このマーカーを含み、アスペルギルス種に対するHMB耐性を付与するアスペルギルス変換ベクトルが構築されました。A. nigerとA. nidulansの両方で、マイクログラムあたりの5-20形質転換体の変換頻度ベクトルDNAが得られました。HMB耐性の選択が適用された場合、他のベクトルとの共吸引型は、両方の種で非常に効率的であることが示されました。

A new, heterologous, dominant marker for selection of Aspergillus transformants is described. This marker is based on the Escherichia coli hygromycin B (HmB) phosphotransferase gene (hph). Expression of the hph gene is controlled by A. nidulans gpd and trpC expression signals. An Aspergillus transformation vector was constructed which contains this marker and confers HmB resistance to Aspergillus species. With both A. niger and A. nidulans, transformation frequencies of 5-20 transformants per micrograms vector DNA were obtained. Cotransformation with other vectors was shown to be very efficient in both species, when selection for HmB resistance was applied.