SV40複製起点でのSimianウイルス40（SV40）大きな腫瘍抗原による特殊な核タンパク質構造のATP依存性形成

ウイルスDNA複製には、Simianウイルス40（SV40）で指定された大きな腫瘍抗原（T抗原）が必要です。その機能を実行するために、T抗原は複製の起源（Orisv40）で二重DNAに結合し、2つのDNA鎖を解き放つヘリカーゼ活性を発揮します。以前の研究では、Orisv40近くのT抗原の2つの結合部位を定義しました。これは、IおよびIIに指定されたサイトです。サイトIIは、ウイルスDNA複製に絶対に必要な64ベースペアコアシーケンス内にあります。電子顕微鏡とゲル電気泳動を使用して、T抗原と起源領域との相互作用を特徴付けました。DNA複製をサポートする条件下でサイトIIへの効果的な結合には、ATPまたは非加水性アナログが必要であることがわかりました。ATPがない場合、T抗原は主にサイトIに結合します。ATPの存在下では、両方のサイトIとIIが占有されており、拘束力が著しく増加します。ATP依存反応は、T抗原の複雑な多量体構造を生成します。T抗原はOrisv40でATP依存性核タンパク質構造を形成すると結論付けています。この核タンパク質複合体は、SV40 DNA複製の正確な開始を提供することをお勧めします。

The large tumor antigen (T antigen) specified by simian virus 40 (SV40) is required for viral DNA replication. To carry out its function, T antigen binds to duplex DNA at the origin of replication (oriSV40) and exerts a helicase activity that unwinds the two DNA strands. Previous work has defined two binding sites for T antigen near oriSV40, designated sites I and II; site II is within the 64-base-pair core sequence absolutely required for viral DNA replication. We have used electron microscopy and gel electrophoresis to characterize the interaction of T antigen with the origin region. We have found that effective binding to site II under conditions that support DNA replication requires ATP or a nonhydrolyzable analog. In the absence of ATP, T antigen binds mainly to site I; in the presence of ATP, both sites I and II are occupied, and binding is markedly increased. The ATP-dependent reaction generates a complex multimeric structure for T antigen. We conclude that T antigen forms an ATP-dependent nucleoprotein structure at oriSV40. We suggest that this nucleoprotein complex provides for the precise initiation of SV40 DNA replication.