生きている哺乳類細胞のミトコンドリアマトリックスにおけるATPレベルの視覚化のためのFRETベースのバイオセンサー「ATEAM」の適用

FörsterResonance Energy Transfer（FRET）を利用した遺伝的にエンコードされたバイオセンサーは、さまざまな細胞プロセスのライブセルイメージングのための強力なツールです。私たちのグループは以前、単一の生細胞内のATPレベルを視覚化するために、「ATEAM」という名前のFRETベースのバイオセンサーのシリーズを開発しました。Ateamは、単一の細胞に対する洞察の窓を提供するだけでなく、単一の生細胞のミトコンドリアマトリックスのATPレベルの視覚化も可能にします。この新しいツールは、リアルタイムでさまざまな治療に応じて、細胞ATPの変化を監視することができます。ここでは、ATEAMを使用して、生細胞におけるミトコンドリアにおけるATPレベルを評価する方法を提示します。この章の最後に、提示された手順をよりよく理解するために、実験結果の例について説明します。

Genetically encoded biosensors utilizing the Förster resonance energy transfer (FRET) are powerful tools for live cell imaging of various cellular processes. Our group has previously developed a series of FRET-based biosensors, named "ATeam," for visualization of ATP levels inside a single living cell. ATeam not only provides a window of insight into a single cell but also allows for visualization of ATP levels in mitochondrial matrix of a single living cell. This novel tool is able to monitor alterations in cellular ATP in response to various treatments in real time. Here we present a method for the evaluation of ATP levels in mitochondria in living cells by using ATeam. At the end of this chapter, an example of experimental results is described for a better understanding of the presented procedure.