タンパク質沈殿と液体クロマトグラフィータンデム質量分析を使用したヒト後期全血におけるバクロフェン、ガバペンチンおよびプレガバリンのスクリーニングと定量化のための検証された方法

治療の導入以来、英国では、バクロフェン（BLF）、ガバペンチン（GBP）、およびプレガバリン（PGL）の処方数が急速に増加しています。欧州連合と米国の最近の研究では、これらの薬物の違法虐待の可能性があることが示されており、死亡が観察されています。シンプルで信頼性が高く、完全に検証された方法は、ヒト後死（PM）血液中のBLF、GBP、およびPGLのスクリーニングと定量化のために開発されました。内部標準としての分析対象とその重水化アナログは、単一の追加のアセトニトリルタンパク質沈殿反応を使用して血液から抽出され、その後、同時確認と定量化のためにトリガーされた動的な複数反応モニタリングモードを備えた液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC-MS-MS）を使用した分析を行いました。。アッセイは、BLFで0.05から1.00 µg/ml、GBPおよびPGLでそれぞれ0.5〜50.0 µg/mlで、すべての分析物でR2> 0.999（n = 9）で線形でした。1日内および日中の不正（n = 80）は、一方向ANOVAを使用して計算されました。8日間にわたる8日間にわたるすべての分析物で有意差（p> 0.99）は観察されませんでした。すべての分析物の平均回復は98.9％を超えていました。検出と定量化の制限は、BLFで0.05 µg/mL、GBPおよびPGLで0.5 µg/mLでした。この方法は、内因性化合物からの干渉がなく、PM毒物学で一般的に遭遇する54の薬物からの干渉がなく、非常に選択的でした。方法の適用性を証明するために、分析のために提出された17 PM血液サンプルが正常に分析されました。BLFのPM血液で観察された濃度範囲は、GBP 1.0-134.0 µg/mL（中央値= 49.0 µg/mL）および2.0-540.0 µg/mL（中央値（中央値）で0.08-102.00 µg/mL（中央値= 0.25 µg/mL）で、= 42.0 µg/ml）PGLの場合。

There has been a rapid increase in the number of prescriptions for baclofen (BLF), gabapentin (GBP) and pregabalin (PGL) in the UK since their introduction to therapy. Recent studies across the European Union and USA have shown the illicit abuse potential of these drugs and deaths have been observed. A simple, reliable and fully validated method was developed for the screening and quantification of BLF, GBP and PGL in human post-mortem (PM) blood. The analytes and their deuterated analogs as internal standard were extracted from blood using a single addition acetonitrile protein precipitation reaction followed by analysis using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS-MS) with triggered dynamic multiple reaction monitoring mode for simultaneous confirmation and quantification. The assay was linear from 0.05 to 1.00 µg/mL for BLF and 0.5 to 50.0 µg/mL for GBP and PGL, respectively with r2 > 0.999 (n = 9) for all analytes. Intra-day and inter-day imprecisions (n = 80) were calculated using one-way ANOVA; no significant difference (P > 0.99) was observed for all analytes over 8 non-consecutive days. The average recovery for all analytes was >98.9%. The limits of detection and quantification were both 0.05 µg/mL for BLF, and 0.5 µg/mL for GBP and PGL. The method was highly selective with no interference from endogenous compounds or from 54 drugs commonly encountered in PM toxicology. To prove method applicability, 17 PM blood samples submitted for analysis were successfully analyzed. The concentration range observed in PM blood for BLF was 0.08-102.00 µg/mL (median = 0.25 µg/mL), for GBP 1.0-134.0 µg/mL (median = 49.0 µg/mL) and 2.0-540.0 µg/mL (median = 42.0 µg/mL) for PGL.