組換えタンパク質の一時的な発現のためのニコチアナ・ベンサミアナ植物におけるDCL2およびDCL4遺伝子の抑制

植物における組換えタンパク質の生産には、安全性やコストの削減など、多くの利点があります。ただし、このテクノロジーは、低レベルの生産を含むいくつかの問題に依然として直面しています。RNAサイレンシングは、RNAサイレンシングが植物細胞の導入遺伝子由来mRNAを効果的に分解するため、RNAサイレンシングの抑制は組換えタンパク質産生の改善に特に重要であると思われます。したがって、これを克服するために、RNA干渉技術を使用して、野生型植物よりもはるかに低いレベルのNBDCL2および/またはNBDCL4 MRNAを持つDCL2およびDCL4再抑制性トランスジェニックニコチアナベンサミアナ植物（ΔD2、ΔD4、およびΔD2ΔD4植物）を開発しました。過渡遺伝子発現アッセイは、ΔD2ΔD4植物が、ΔD2、ΔD4、および野生型植物よりも多くの緑色蛍光タンパク質（GFP）およびヒト酸性線維芽細胞成長因子（AFGF）を蓄積したことを示しました。さらに、GFPおよびAFGF mRNAのレベルは、ΔD2、ΔD4、および野生型植物よりもΔD2ΔD4植物でも高かった。これらの発見は、ΔD2ΔD4植物が野生型植物よりも多くの組換えタンパク質を発現するため、組換えタンパク質産生に有用であることを示しています。

The production of recombinant proteins in plants has many advantages, including safety and reduced costs. However, this technology still faces several issues, including low levels of production. The repression of RNA silencing seems to be particularly important for improving recombinant protein production because RNA silencing effectively degrades transgene-derived mRNAs in plant cells. Therefore, to overcome this, we used RNA interference technology to develop DCL2- and DCL4-repressed transgenic Nicotiana benthamiana plants (ΔD2, ΔD4, and ΔD2ΔD4 plants), which had much lower levels of NbDCL2 and/or NbDCL4 mRNAs than wild-type plants. A transient gene expression assay showed that the ΔD2ΔD4 plants accumulated larger amounts of green fluorescent protein (GFP) and human acidic fibroblast growth factor (aFGF) than ΔD2, ΔD4, and wild-type plants. Furthermore, the levels of GFP and aFGF mRNAs were also higher in ΔD2ΔD4 plants than in ΔD2, ΔD4, and wild-type plants. These findings demonstrate that ΔD2ΔD4 plants express larger amounts of recombinant proteins than wild-type plants, and so would be useful for recombinant protein production.