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RNAの代謝産物である修飾ヌクレオシドは、形態学的異常の出現前の癌の潜在的なバイオマーカーです。がんのバイオマーカーの発見のために、ヒト尿中のヌクレオシドを包括的に検出して特定することは非常に重要です。ただし、存在量が少なく、極性が大きく、マトリックス効果により、尿中ヌクレオシドを検出することが困難になります。このホワイトペーパーでは、統合された方法は、サンプル調製と、それに続いて超体型液体クロマトグラフィー四重極四肢質量分析（UPLC Q-TOF/MS）の検出と一次識別、次にハイブリッドトリプル四重極線形と結合した超高性能液クロマトグラフィーが続くことで構成されていました。イオントラップ質量分析計（UHPLC Q-TRAP/MS）さらに識別と検証が導入されました。第一に、ヌクレオシドを濃縮して尿マトリックス効果を排除するために、固相抽出（SPE）の異なる吸着剤材料と溶出条件をスクリーニングしました。第二に、UPLC Q-TOF/MSを使用して、MSEモードで質量データを取得しました。尿サンプル中のヌクレオシドの構造式は、主に保持時間、正確な質量前駆体イオン、および社内データベースおよびオンラインデータベースからの断片イオンに従って同定されました。第三に、特徴的なフラグメントイオンを欠く予備的な同定されたヌクレオシド構造は、複数の反応モニタリングトリガー拡張産物イオンスキャン（MRM-EPI）および中性損失スキャン（NL）でUHPLC Q-TRAP/MSによって検証されました。最後に、フェニルボロン酸（PBA）ベースのSPEは、最適化された抽出条件下でのMSシグナルが高く、マトリックス効果が弱いため利用されました。55のヌクレオシドが主にUPLC Q-TOF/MSによって同定され、その中で50のヌクレオシドがUHPLC Q-TRAP/MSによって確認されました。5つのヌクレオシド、すなわち4 '、5'-ジデヒドロ-deoxyadenosine、4'、5'-ジドロ-5'-デオキシイノシン、イソニコチンアミドリボシド、ペルオキシウィブトシン、およびヒドロキシワイブトシンは、初めて尿から発見されました。結果は、ヒトメタボロームデータベース（HMDB）を拡張します。
RNAの代謝産物である修飾ヌクレオシドは、形態学的異常の出現前の癌の潜在的なバイオマーカーです。がんのバイオマーカーの発見のために、ヒト尿中のヌクレオシドを包括的に検出して特定することは非常に重要です。ただし、存在量が少なく、極性が大きく、マトリックス効果により、尿中ヌクレオシドを検出することが困難になります。このホワイトペーパーでは、統合された方法は、サンプル調製と、それに続いて超体型液体クロマトグラフィー四重極四肢質量分析（UPLC Q-TOF/MS）の検出と一次識別、次にハイブリッドトリプル四重極線形と結合した超高性能液クロマトグラフィーが続くことで構成されていました。イオントラップ質量分析計（UHPLC Q-TRAP/MS）さらに識別と検証が導入されました。第一に、ヌクレオシドを濃縮して尿マトリックス効果を排除するために、固相抽出（SPE）の異なる吸着剤材料と溶出条件をスクリーニングしました。第二に、UPLC Q-TOF/MSを使用して、MSEモードで質量データを取得しました。尿サンプル中のヌクレオシドの構造式は、主に保持時間、正確な質量前駆体イオン、および社内データベースおよびオンラインデータベースからの断片イオンに従って同定されました。第三に、特徴的なフラグメントイオンを欠く予備的な同定されたヌクレオシド構造は、複数の反応モニタリングトリガー拡張産物イオンスキャン（MRM-EPI）および中性損失スキャン（NL）でUHPLC Q-TRAP/MSによって検証されました。最後に、フェニルボロン酸（PBA）ベースのSPEは、最適化された抽出条件下でのMSシグナルが高く、マトリックス効果が弱いため利用されました。55のヌクレオシドが主にUPLC Q-TOF/MSによって同定され、その中で50のヌクレオシドがUHPLC Q-TRAP/MSによって確認されました。5つのヌクレオシド、すなわち4 '、5'-ジデヒドロ-deoxyadenosine、4'、5'-ジドロ-5'-デオキシイノシン、イソニコチンアミドリボシド、ペルオキシウィブトシン、およびヒドロキシワイブトシンは、初めて尿から発見されました。結果は、ヒトメタボロームデータベース（HMDB）を拡張します。
Modified nucleosides, metabolites of RNA, are potential biomarkers of cancer before the appearance of morphological abnormalities. It is of great significance to comprehensively detect and identify nucleosides in human urine for discovery of cancer biomarkers. However, the lower abundance, the greater polarity and the matrix effects make it difficult to detect urinary nucleosides. In this paper, an integrated method consisted of sample preparation followed by ultraperformance liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry (UPLC Q-TOF/MS) detection and primary identification, then ultra-high performance liquid chromatography coupled with hybrid triple quadrupole linear ion trap mass spectrometer (UHPLC Q-Trap/MS) further identification and validation were introduced. Firstly, to enrich the nucleosides and eliminate the urine matrix effects, different sorbent materials of solid phase extraction (SPE) and the elution conditions were screened. Secondly, UPLC Q-TOF/MS was used to acquire mass data in MSE mode. The structural formulas of nucleosides in urine sample were primarily identified according to retention time, accurate mass precursor ions and fragment ions from in-house database and online database. Thirdly, the preliminary identified nucleoside structures lacking of characteristic fragment ions were verified by UHPLC Q-Trap/MS in multiple reaction monitoring trigger enhanced product ion scan (MRM-EPI) and neutral loss scan (NL). At last, phenylboronic acid (PBA)-based SPE was utilized due to its higher MS signal and weaker matrix effects under optimized extraction conditions. Fifty-five nucleosides were primarily identified by UPLC Q-TOF/MS, among which 50 nucleosides were confirmed by UHPLC Q-Trap/MS. Five nucleosides, namely 4',5'-didehydro-5'-deoxyadenosine, 4',5'-didehydro-5'-deoxyinosine, isonicotinamide riboside, peroxywybutosine and hydroxywybutosine, were found from urine for the first time. The results will expand the Human Metabolome Database (HMDB).
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