ヒト全血における天然キラー細胞溶解活性のフローサイトメトリー分析

NK細胞の細胞毒性は、NK細胞機能に対する外部介入の効果を決定するために広く使用されている尺度です。ただし、このアッセイの精度と再現性は、ユーザーのエラーのため、または実験的操作に対するNK細胞の感度のいずれかのために不安定であると見なすことができます。これらの問題を排除するために、それらを最小限に抑えるワークフローが確立され、ここに示されています。説明するために、さまざまな時点で、激しい運動のために提出されたランナー（n = 4）から血液サンプルを取得しました。第一に、NK細胞は、全血から、わずか1ミリリットルから直接、CD56タグ付けと磁気ベースの選別によって同時に識別および分離されます。ソートされたNK細胞は、試薬またはキャッピング抗体から除去されます。それらは、血液のミリリットルあたりの正確なNK細胞数を確立するためにカウントできます。第二に、分類されたNK細胞（エフェクター細胞またはE）は、アッセイ最適でK562細胞（標的細胞またはT）にタグ付けされた3,3'-ジオタデシカルボシアニン過塩素酸塩（DIO）と混合できます。ダブレットまたはエフェクター細胞）。このワークフローは約4時間で完了でき、人間のサンプルを操作する場合でも非常に安定した結果が得られます。利用可能な場合、研究チームは、人間の被験者のいくつかの実験的介入をテストし、データの完全性を損なうことなく、いくつかの時点で測定値を比較できます。

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and reproducibility of this assay can be considered unstable, either because of user's errors or because of the sensitivity of NK cells to experimental manipulation. To eliminate these issues, a workflow that reduces them to a minimum was established and is presented here. To illustrate, we obtained blood samples, at various time points, from runners (n = 4) that were submitted to an intense bout of exercise. First, NK cells are simultaneously identified and isolated through CD56 tagging and magnetic-based sorting, directly from whole blood and from as little as one milliliter. The sorted NK cells are removed of any reagent or capping antibodies. They can be counted in order to establish an accurate NK cell count per milliliter of blood. Secondly, the sorted NK cells (effectors cells or E) can be mixed with 3,3'-Diotadecyloxacarbocyanine Perchlorate (DiO) tagged K562 cells (target cells or T) at an assay-optimal 1:5 T:E ratio, and analyzed using an imaging flow-cytometer that allows for the visualization of each event and the elimination of any false positive or false negatives (such as doublets or effector cells). This workflow can be completed in about 4 h, and allows for very stable results even when working with human samples. When available, research teams can test several experimental interventions in human subjects, and compare measurements across several time points without compromising the data's integrity.