チラミド（SPPLAT）を使用した選択的プロテオーム近接標識アッセイ：局所膜結合タンパク質クラスターのプロテオーム解析のための定量的方法

この原稿は、空間的に制限された膜微小環境に局在するタンパク質を識別する新しい一般的な方法を説明しています。西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）は、一次または二次抗体、抗原または基質、薬物、または毒素に共有結合することにより、標的タンパク質と接触します。次に、ビオチン化チラミドベースの試薬が追加されます。HRPと過酸化水素の存在下では、試薬はフリーラジカルに変換され、数十から数百から数百のナノメートル以内にタンパク質を共有結合する前に、短い距離にのみ拡散します。次に、ビオチン化タンパク質は、標準的なアフィニティクロマトグラフィーによって分離され、液体クロマトグラフィー（LC）および質量分析（MS）によって同定されます。このアッセイは、細胞培養（SILAC）のアミノ酸を伴う安定した同位体標識またはペプチドレベルでの等変量タグ付けを使用することにより、定量的にすることができます。©2017 by John Wiley＆Sons、Inc。

This manuscript describes a new and general method to identify proteins localized into spatially restricted membrane microenvironments. Horseradish peroxidase (HRP) is brought into contact with a target protein by being covalently linked to a primary or secondary antibody, an antigen or substrate, a drug, or a toxin. A biotinylated tyramide-based reagent is then added. In the presence of HRP and hydrogen peroxide, the reagent is converted into a free radical that only diffuses a short distance before covalently labeling proteins within a few tens to hundreds of nanometers from the target. The biotinylated proteins can then be isolated by standard affinity chromatography and identified by liquid chromatography (LC) and mass spectrometry (MS). The assay can be made quantitative by using stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC) or isobaric tagging at the peptide level. © 2017 by John Wiley & Sons, Inc.