N末端またはシグナルペプチド配列エンジニアリングは、ヒトモノクローナル抗体光鎖の切り捨てを防ぎます

モノクローナル抗体（MAB）には、成熟抗体を含む個々のポリペプチドごとに短いN末端シグナルペプチドが含まれており、それらが生成された細胞からの輸出を標的としています。シグナルペプチドは、ERへの転座後および分泌の前に、各重鎖（HC）および軽鎖（LC）ポリペプチドから切断されます。このプロセスは一般に非常に効率的であり、正しく切断されたHCおよびLCポリペプチドの高い割合を生成します。ただし、シグナルペプチドの誤切断が発生する可能性があり、HCまたはLCのN末端での切り捨てまたは伸長が生じる可能性があります。これは、有効性に影響を与え、製品の不均一性をもたらす可能性があるため、抗体製造にとって望ましくありません。ここでは、中国のハムスター卵巣細胞における組換えヒトIgG1 MEDI8490のルーチン開発可能性評価中に検出されたLCの切り捨てられたバリアントについて説明します。N末端にSyeアミノ酸モチーフを含むラムダLCとともに、マウスHCシグナルペプチドの使用により、LCの切り捨てが引き起こされたことがわかりました。この切り捨ては、LCをコードするmRNAの誤処理によって引き起こされるのではなく、FRBバッチ培養またはクローン系統のスケールである発現プラットフォーム（過渡または安定）に依存していませんでした。さらに、代替シグナルペプチドまたはエンジニアリングを使用して、LC Sye n末端モチーフが切り捨てを妨げ、この戦略により他のSye Lambda LC含有MABのLC均一性が改善されることを示します。バイオテクノール。Bioeng。2017; 114：1970-1977。©2017 Wiley Periodicals、Inc。

Monoclonal antibodies (mAbs) contain short N-terminal signal peptides on each individual polypeptide that comprises the mature antibody, targeting them for export from the cell in which they are produced. The signal peptide is cleaved from each heavy chain (Hc) and light chain (Lc) polypeptide after translocation to the ER and prior to secretion. This process is generally highly efficient, producing a high proportion of correctly cleaved Hc and Lc polypeptides. However, mis-cleavage of the signal peptide can occur, resulting in truncation or elongation at the N-terminus of the Hc or Lc. This is undesirable for antibody manufacturing as it can impact efficacy and can result in product heterogeneity. Here, we describe a truncated variant of the Lc that was detected during a routine developability assessment of the recombinant human IgG1 MEDI8490 in Chinese hamster ovary cells. We found that the truncation of the Lc was caused due to the use of the murine Hc signal peptide together with a lambda Lc containing an SYE amino acid motif at the N-terminus. This truncation was not caused by mis-processing of the mRNA encoding the Lc and was not dependent on expression platform (transient or stable), the scale of the fed-batch culture or clonal lineage. We further show that using alternative signal peptides or engineering the Lc SYE N-terminal motif prevented the truncation and that this strategy will improve Lc homogeneity of other SYE lambda Lc-containing mAbs. Biotechnol. Bioeng. 2017;114: 1970-1977. © 2017 Wiley Periodicals, Inc.