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血清25-ヒドロキシビタミンD [25（OH）D]の測定は、ビタミンD状態の最良の指標と考えられています。2つのマイナーなビタミンD代謝産物は、25（OH）Dアッセイで遭遇する一般的な干渉です。1つ目は、3-EPI-25-ヒドロキシビタミンD3 [3-EPI-25（OH）D3]で、25-ヒドロキシビタミンD3 [25（OH）D3]からクロマトグラフィー的に分解されない場合、25（OH）D濃度を過大評価できます。2番目は24R、25-ジヒドロキシビタミンD3 [24R、25（OH）2D3]で、25（OH）Dイムノアッセイで抗体と交差することができます。私たちの目的は、誘導体化剤を使用せずに血清中の3-EPI-25（OH）24R、25（OH）2D3の両方を検出できるLC-MS/MSメソッドを開発することでした。エレクトロスプレーイオン化を陽性モードで同時に検出できるアイソトープ希釈LC-MS/MSメソッドを報告します。-hydroxyvitamin D2。この方法は、150μlの血清と10分の合計実行時間を使用して、費用対効果の高い液液抽出を採用しています。メソッドのパフォーマンスは、分析物がスパイクされた血清の代替として、プールされた血清から作られた品質管理を使用して評価されました。もともと化学発光微粒子イムノアッセイ（CMIA）によって分析されたバイオバンクサンプルは、この方法で再分析して、25（OH）2D3交差反応性の25（OH）D測定バイアスへの寄与を決定しました。LC-MS/MSに対する25（OH）D測定値のCMIA過剰過大評価は、25（OH）Dと24R、25（OH）2D3濃度の両方に依存することがわかりました。
血清25-ヒドロキシビタミンD [25（OH）D]の測定は、ビタミンD状態の最良の指標と考えられています。2つのマイナーなビタミンD代謝産物は、25（OH）Dアッセイで遭遇する一般的な干渉です。1つ目は、3-EPI-25-ヒドロキシビタミンD3 [3-EPI-25（OH）D3]で、25-ヒドロキシビタミンD3 [25（OH）D3]からクロマトグラフィー的に分解されない場合、25（OH）D濃度を過大評価できます。2番目は24R、25-ジヒドロキシビタミンD3 [24R、25（OH）2D3]で、25（OH）Dイムノアッセイで抗体と交差することができます。私たちの目的は、誘導体化剤を使用せずに血清中の3-EPI-25（OH）24R、25（OH）2D3の両方を検出できるLC-MS/MSメソッドを開発することでした。エレクトロスプレーイオン化を陽性モードで同時に検出できるアイソトープ希釈LC-MS/MSメソッドを報告します。-hydroxyvitamin D2。この方法は、150μlの血清と10分の合計実行時間を使用して、費用対効果の高い液液抽出を採用しています。メソッドのパフォーマンスは、分析物がスパイクされた血清の代替として、プールされた血清から作られた品質管理を使用して評価されました。もともと化学発光微粒子イムノアッセイ（CMIA）によって分析されたバイオバンクサンプルは、この方法で再分析して、25（OH）2D3交差反応性の25（OH）D測定バイアスへの寄与を決定しました。LC-MS/MSに対する25（OH）D測定値のCMIA過剰過大評価は、25（OH）Dと24R、25（OH）2D3濃度の両方に依存することがわかりました。
Measurement of serum 25-hydroxyvitamin D [25(OH)D] is considered the best indicator of vitamin D status. Two minor vitamin D metabolites are common interferences encountered in 25(OH)D assays. The first is 3-epi-25-hydroxyvitamin D3 [3-epi-25(OH)D3], which if not chromatographically resolved from 25-hydroxyvitamin D3 [25(OH)D3], can overestimate 25(OH)D concentrations. The second is 24R,25-dihydroxyvitamin D3 [24R,25(OH)2D3], which can cross-react with the antibodies in 25(OH)D immunoassays. Our aim was to develop an LC-MS/MS method capable of detecting both 3-epi-25(OH)D3 and 24R,25(OH)2D3 in serum without the use of a derivatization agent. We report an isotope dilution LC-MS/MS method, with electrospray ionization in the positive mode, that can simultaneously detect 24R,25(OH)2D3, 25(OH)D3, 3-epi-25(OH)D3, and 25-hydroxyvitamin D2. The method employs a cost-effective liquid-liquid extraction using only 150μL of sera and a total run time of 10min. Method performance was assessed by using quality controls made from pooled sera as an alternative to sera spiked with analytes. Biobanked samples, originally analyzed by chemiluminescent microparticle immunoassay (CMIA), were re-analyzed with this method to determine the contribution of 24R,25(OH)2D3 cross-reactivity to 25(OH)D measurement bias. The CMIA over-estimation of 25(OH)D measurements relative to LC-MS/MS was found to depend on both 25(OH)D and 24R,25(OH)2D3 concentrations.
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