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逆位相クロマトグラフィーは、ペプチド分離の確立された方法であり、プロテオーム解析のためにエレクトロスプレーイオン化質量分析と頻繁に結合されます。カラム温度は、ペプチドの保持と溶出に影響を与えるパラメーターの1つですが、その実装には追加の機器とメソッドの最適化が必要なため、見落とされがちです。2列のセットアップの3つの領域で温度操作を可能にする装置を評価し、クロマトグラフィーの改善について評価されました。市販の標準を使用して、サンプル負荷中の低カラム温度（0°C）がいくつかのウシ血清アルブミン親水性ペプチドのピーク形状を強化することを実証します。消化されたHeLa溶解物の場合、500 ngのサンプルを低温でロードした後、前門温度を50°Cに上げることにより、約15％多くのペプチド同定が得られました。この方法では、-2未満の水腫度値の壮大な平均で追加の早期溶出ペプチドを特定しました。また、翻訳後修飾を伴うペプチドに対する冷たいカラム温度の影響を調査しました。分析カラムの温度を5°Cに低下させたとき、イソスパルタル化ペプチドとその変更されていないバージョンの溶融を最小限に抑えることができました。クロマトグラフィーを改善するための低温の有用性を実証することは別として、特定の場所と時点での適用は、ペプチドの検出と分離に重要です。
逆位相クロマトグラフィーは、ペプチド分離の確立された方法であり、プロテオーム解析のためにエレクトロスプレーイオン化質量分析と頻繁に結合されます。カラム温度は、ペプチドの保持と溶出に影響を与えるパラメーターの1つですが、その実装には追加の機器とメソッドの最適化が必要なため、見落とされがちです。2列のセットアップの3つの領域で温度操作を可能にする装置を評価し、クロマトグラフィーの改善について評価されました。市販の標準を使用して、サンプル負荷中の低カラム温度（0°C）がいくつかのウシ血清アルブミン親水性ペプチドのピーク形状を強化することを実証します。消化されたHeLa溶解物の場合、500 ngのサンプルを低温でロードした後、前門温度を50°Cに上げることにより、約15％多くのペプチド同定が得られました。この方法では、-2未満の水腫度値の壮大な平均で追加の早期溶出ペプチドを特定しました。また、翻訳後修飾を伴うペプチドに対する冷たいカラム温度の影響を調査しました。分析カラムの温度を5°Cに低下させたとき、イソスパルタル化ペプチドとその変更されていないバージョンの溶融を最小限に抑えることができました。クロマトグラフィーを改善するための低温の有用性を実証することは別として、特定の場所と時点での適用は、ペプチドの検出と分離に重要です。
Reversed phase chromatography is an established method for peptide separation and frequently coupled to electrospray ionization-mass spectrometry for proteomic analysis. Column temperature is one parameter that influences peptide retention and elution, but it is often overlooked as its implementation requires additional equipment and method optimization. An apparatus that allows temperature manipulation in three areas of a two-column setup was evaluated for improvements in chromatography. Using commercially available standards, we demonstrate that a low column temperature (0 °C) during sample loading enhances the peak shape of several bovine serum albumin hydrophilic peptides. For digested HeLa lysates, approximately 15% more peptide identifications were obtained by increasing the precolumn temperature to 50 °C after the 500 ng sample was loaded at a low temperature. This method also identified additional early eluting peptides with grand average of hydropathicity values less than -2. We also investigated the effect of cooler column temperatures on peptides with post-translational modifications. It was possible to minimize the coelution of an isoaspartylated peptide and its unmodified version when the analytical column temperature was decreased to 5 °C. Aside from demonstrating the utility of lower temperatures for improved chromatography, its application at specific locations and time points is critical for peptide detection and separation.
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