液体クロマトグラフィータンデム質量分析を使用して魚油に由来するカルボニル種のリピドーム分析

脂質過酸化はカルボニル種を生じさせ、その一部は反応性であり、多くのヒト疾患の病因に役割を果たします。オイルは、酸化ストレス下でこれらの化合物を生成するために簡単に酸化することができる遍在する供給源です。この現在の研究では、液体クロマトグラフィータンデム質量分析を使用して、オメガ3脂肪酸が豊富な供給源である魚油、ケトン、ケトンの同時測定のための標的リピドーム法を開発しました（LC-MS/MS）。分析物には、アクロレイン、クロトンアルデヒド、トランス-4-ヒドロキシ-2-ヘクセナル（HHE）、トランス-4-ヒドロキシ-2-ノネール（HNE）、トランス4-OXO-2などの高毒性反応性カルボニル種（RCS）が含まれます。-nonenal（1）、グリオキサール、メチルグリオキサール。これらはすべて、脂質過酸化のバイオマーカーを有望です。それらは、in vitro Fe（II）媒介酸化を使用して形成され、定量的アッセイの実現可能性のために2,4-ジニトロフェニルヒドラジン（DNPH）を使用して誘導体化されました。分析の前に、固相抽出（SPE）を使用してサンプルをさらにクリーニングしました。この脂肪酸を使用して、オメガ-3と6脂肪酸の間のカルボニル化合物の生成のユニークな異なるパターンが観察されました。開発された方法の両方が検証され、10個の異なる魚油製品を使用した脂質過酸化によるカルボニル種の形成を監視するために正常に適用されました。分析物の監視対象データセットとその親脂肪酸との間の相関の仮説も、ピアソンの相関テストを使用してテストされました。結果は、私たちの方法が脂質過酸化研究のための有用な分析ツールであることを示しています。

Lipid peroxidation gives rise to carbonyl species, some of which are reactive and play a role in the pathogenesis of numerous human diseases. Oils are ubiquitous sources that can be easily oxidized to generate these compounds under oxidative stress. In this present work, we developed a targeted lipidomic method for the simultaneous determination of thirty-five aldehydes and ketones derived from fish oil, the omega-3 fatty acid-rich source, by using liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). The analytes include highly toxic reactive carbonyl species (RCS) such as acrolein, crotonaldehyde, trans-4-hydroxy-2-hexenal (HHE), trans-4-hydroxy-2-nonenal (HNE), trans-4-oxo-2-nonenal (ONE), glyoxal and methylglyoxal, all of which are promising biomarkers of lipid peroxidation. They were formed using in vitro Fe(II)-mediated oxidation, and derivatized using 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) for the feasibility of quantitative assay. Before analysis, solid phase extraction (SPE) was used to clean samples further. Uniquely different patterns of carbonyl compound generation between omega-3 and 6 fatty acids were observed using this lipidomic approach. The method developed was both validated, and successfully applied to monitor formation of carbonyl species by lipid peroxidation using ten different fish oil products. Hypotheses of correlations between the monitored dataset of analytes and their parent fatty acids were also tested using the Pearson's correlation test. Results indicate our method is a useful analytical tool for lipid peroxidation studies.